200191. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új dipeptidek előállítására
HU 200191 B etíl-acetátos fázist telített vizes nátrium-klorid oldattal mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk végül csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot szilikagéles preparatív vékonyrétegkromatográíiával tisztítjuk (előhívó oldószer kloroform/metanol= 5/1 térfogatarátiy), így 64 mg (2RS,3S)-3-{N-(2-(l-naftil-metil)-3-(morfolino-karbonil)-propionil]-L-hisztidil) -amino-4-ciklohexil-2- hidroxi-N-izobutil-butir-amidot kapunk, fehér por formájában. Olvadáspont 119-125 *C. Rfi: 044 Rfr 0,41 MS: MH^: 703. 3. példa (2RS, 3S)-3-{N-[2-(l-naftil-metil)-3-(morfoIinokarbonil)-pn>pionil]-L-hisztidil)-amino4-tíklohexil- 2-hidroxi-vajsav-ciklopentilészter (C vegyület) 100 mg N-[2-(l-naftil-metil)-3-(moifolino-karbonil)-propionil]-L-hisztidin-metilészter 1 ml metanolban készült oldatához 0,20 ml 1 n vizes nátrium-hidroxid oldatot adunk jeges hűtés és keverés közben. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük jeges hűtés közben, majd még további 14 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten. Ezután a reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradék és 55 mg (2RS, 3S)-3-ammo-4-cikk>hexil-2-hidroxi-vajsav-ciklopen tilészter-hidroklorid 2 ml N,N-dimetil-forrnamidban készült oldatához 0,046 ml difenil-foszforil-azidot és 0,030 ml trietil-amint adunk keverés és jees hűtés közben, majd az elegyet 14 óra hosszat keverjük jeges hűtés közben. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk és 5%-os vizes nátriűm-hidrogénkarbonát oldatot adunk a maradékhoz. Az elegyet etil-acetáttal extraháljuk és az etil-acetátos fázist telített vizes nátrium-klorid oldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot szilikagéles preparatív vékonyrétegkromatográfiával tisztítjuk (előhívó oldószer. kloroform/metanol= 5/1 térfogat arány), így 41 mg (2RS, 3S)-3-{N-{2-( 1 -nafitiLirietil)-3-(morfolino-karbonil)-propioml} -L-hisztidil) - amino-4-cikk)hexil-2-hidroxi-vajsav-ciklopentiIésztert kapunk, fehér por formájában. Olvadáspont: 95-100 *C. Rfi: 049 Rf2:048 MS: MH*: 716. 4. példa A 3. példában leírtakhoz hasonló módon a következő vegyületeket állítjuk elő: (2R, 3S)-3-{N-[2-(l-naftil-metil)-3-(morfolinökarbonil)-propionil]-L-hisztidil} -amino-4-ciklohexil- 2-hidroxi-vajsav-izopropilészter (D vegyület). Fehér por. Olvadáspont* 99-104 *C. Rfi: 049. Rf2:0,50. MS: MH+: 690. 20 g D vegyületnek 58 ml 0,5 n HCl-val készített oldatát fagyasztva szárítva 20,5 g (2R, 3S>3-{N-(2- (1 -naftil-metil)-3-(morfolino-karbonil)-propionilj-L- hisztidil} -amino-4-ciklohexil-2-hSdrbrti-vajsav-izopropilészter-hidioklOTidot kapunk, fehér por formájá-11 ban. Olvadáspont: 125-128 *C. IR (KBr): v CO 1730,1625 cm'1. (2RS, 3S)-3-{N-[2-(l-naftiI-metil)-3-(morfoíinokarbonil)-propionil]-L-hisztídii-amino-4-ciklohexil- 2-hidroxi-vajsav-ciklohexilészter (E vegyidet). Fehér por. Olvadáspont 110-115 *C. Rft: 0 49 Rfr 048 MS: MH+: 730 4-(2RS, 3S)-3-{N-[2-(l-nafti!-metil)-3-(morfolino-karbonil)-propionil]-L-hisztidil) -amino-4-ciklohexil-2-hidróxi-butiril-morfolino (F vegyidéi). Fehér por. Olvadáspont 118-125 'C. Rft: 0,57 Rf2:041 MS: mt: 111 (2RS, 3S)-3- {N-(2-( 1 -naftil-metil)-3-(moifolinokarix>nil)-propionil]-L-hisztidil5-amino-4-ciklohexii- 2-hidroxi-vajsav-14-difluor-2-propilészter (G vegyület). Fehér por. Olvadáspont 116-122 ‘C. Rfi: 047 Rf2= 043 MS: MH+: 726 S. példa ln vitro inhibitor hatás humán renin-juh renin szubsztrát reakciós rendszerben 5 mM EDTA x 2 Na-t és 0,1% neomicin-szulfátot tartalmazó, 200 pl 125 mM-os pirofoszfát puffá (pH= 7,4), 25 pl 20 mM-os L-fenü-alanin-L-aJanin- L-prolin angiotenzin átalakító enzim inhibitor, 50 pl félig tisztított juh renin szubsztrát (2000 ng angiotenzin I:eq/ml), 50 pl, dimetil-szulfoxidos oldatban lévő találmány szerinti aminosav-származék és 150 pl ionmentesített víz keverékéhez 25 pl tisztított humán renint (20-30 ng angiotenzin I/ml/óra) adunk. A keveréket 15 percig vízfürdőn inkubáljuk 37 *C-on és a reakcióelegyet 5 percig állni hagyjuk a vízfürdőn 100 *C-on, a reakcióó leállítása céljából. Lehűtés után az oldat 200 pJ-jét vesszük és a renin hozzáadására keletkezett angiotenzin I mennyiségét radioimmun vizsgálattal meghatározzuk. (A vizsgálatot renin riábead kit felhasználásával /DAINABOT/ végezzük.) Az inhibit«: hatást az alábbi egyenlet segítségével számítottuk ki. Kontrollként ugyanazt az eljárást hajtjuk végre, mint előbb, de csak 50 p dimetü-szulfoxidot használunk, a találmány szerinti vegyület dimetil-szulfoxidos oldata helyett. Gátlás %= [(Az angiotenzin I mennyisége a kontroliban - Az angiotenzin I mennyisége a találmány szerinti vegyületet tartalmazó elegyen)/ az angiotenzin I mennyisége a kontroliban] x 100 Az 50%-os gátlást kifejtő mólkoncentrációt (ICjo) a kapott gátlás értékekből számoltuk ki. az eredmények az alábbiakban láthatók: Vegyület IC50 12 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
