200101. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán szövet plazminogén aktivátort tartalmazó stabilizált gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 200101 B 2 A találmány tárgya eljárás olyan új gyógyszerkészítmények előállítására, amelyek a humán szövet plazminogén aktivátor (t-PA) proteint tartalmazzák. Közelebbről, a találmány tárgya eljárás a .t-PA komponens szempontjából javított stabilitású és oldhatósági tulajdonságú gyógyszerkészítmények előállítására, amelyek könnyű liofilizálást, és ezen keresztül olyan stabil, liofilizált formák előállítását teszik lehetővé, amelyek hatékonyan használhatók humán terápiás célokra. A humán hullák érrendszeréből extrahált vaszkuláris plazminogén aktivátor instabilitását Aoki [J. Bioi. Chem. (Tokió), 75, 731 (1974)] irta le. Aoki azt találta, hogy az aktívátort csak nagy nátrium-klorid koncentrációk, közelebbről, körülbelül 0,5 mólnál nagyobb nátrium-klorid koncentrációk stabilizálták. Binder és munkatársai [J. Bioi. Chem. 254, 1998 (1979)] leirták, hogy egy többlépéses tisztítási eljárás során magas só- és arginin-tartalmú pufferek alkalmazása alapvető az emberi hullák perfuzátjaiból származó vaszkuláris plazminogén aktivátor aktivitásának fenntartásához. A tisztítási lépéseket 0,3 - 1,0 mól nátrium-klorid és 0,1 mól arginin jelenlétében hajtották végre. Radcliff és munkatársai [Arch, of Biochem. and Biophy. 189, 185 (1978)] a plazminogén aktivátor humán plazmából történő elkülönítését Írták le lizin-Sepharose-on végzett kromatografálással. Egy kísérletben a stabilizált plazmából nyert nyers plazminogén aktivótort lizin-Sepharose-zal eluálták, 0 - - 0,5 mól, 0,6 mólos nátrium-kloridban jelenlévő arginin gradienst alkalmazva. Természetes szövet forrásból származó humán szövet plazminogén aktivátort ismertetnek Collen és munkatársai az 1981. december 16-án nyilvánosságra hozott, 1980. június 11—i elsőbbséget igénylő 041766. számú európai szabadalmi bejelentésben. A szerzők olyan tisztítási rendszert alkalmaztak, amely a szövet plazminogén aktivótort viszonylag nagy tisztaságban bocsátja rendelkezésre. Collen és munkatársai tanulmányozták tisztított szövet plazminogén aktivátor készítményeik stabilitását is, mind folyékony, mind liofilizált állapotban, és azt találták, hogy a liofilizált formák reprodukálhatván labilisak voltak, még akkor is, ha 0,3 mól nátrium-kloridot tartalmazó oldatokból kerültek előállításra. Annak érdekében, hogy a szövet plazminogén aktivátorhoz hasonló anyagokat az egészségügyi dolgozók illetve a betegek rendelkezésére lehessen bocsátani, ezeket gyógyszerkészítmények formájában kell kiszerelni. Az ilyen készítményeknek alkalmas ideig stabilaknak kell lenniük, alkalmasaknak kell lenniük humán alkalmazásra, és könnyen előállithatóknak kell lenniük. Ilyen készítmény lehetne például egy parenterólis adagolásra alkalmas oldat. Bár sok esetben az oldatos gyógyszerkészítményeket folyadék formában, közvetlen adagolásra alkalmas módon szerelik ki, elóállihatók fagyasztott vagy liofilizált formában is. Az előbbi esetben a készítményt használat előtt fel kell olvasztani. Az utóbbi megoldást gyakran azzal a céllal használják, hogy a készítmény hatóanyagának stabilitását változó tárolási körülmények között javítsák, miután szakember számára ismeretes, hogy a liofilizált készítmények általában stabilabbak, mint folyékony megfelelőik. Az ilyen liofilizált készítményeket alkalmazás előtt alkalmas, gyógyászatiig elfogadható higitóanyag(ok), például injekciók esetében steril viz vagy steril fiziológiás sóoldat hozzáadásával vissza lehet alakítani eredeti formájukba. A találmány stabil humán szövet plazminogén aktivátor készítmények, különösen liofilizált formában stabil készítmények előállítására vonatkozik. Találmányunk azon a felismerésen alapul, hogy az arginin (argininium ionként történő) bevitele a szövet plazminogén aktívótor (t-PA) egy gyógyászatiig elfogadható készítményébe szignifikánsan növeli a t-PA stabilitását és oldhatóságát, és - alkalmas ellenionokkal társítva - stabil, liofilizált kiszerelési formák előállítását teszi lehetővé. Általában a készítmények más komponenseket is tartalmazhatnak előnyösen olyan mennyiségben, amely nem akadálya stabil, liofilizált formák előállításának, és olyan, mennyiségben, amely alkalmas hatásos, biztonságos gyógyszerkészítmények előállítására. A találmány szerinti készítményekben a pH körülbelül 4 és 9 között kell, hogy legyen, előnyösen azonban - miután a készítményeket gyógyászati alkalmazásra szánjuk - a fiziológiás tartományban van, tehát közel semleges. Ebben a pH tartományban az arginin elsődlegesen -ti töltésű protonált kation formájában van jelen, amely .argininium ion’-nak nevezhető. Az .arginin' kifejezést az .argininium ion* kifejezéssel azonos értelemben használjuk, mert a rendszer pH-jónak következtében az .argininium ion* ekvivalens megjelölés. Az elektromos semlegesség megtartása érdekében az argininium iont ekvivalens mennyiségű, ellentétes töltésű (azaz negatív) ionnal kell semlegesíteni. Az ilyen ionokat .ellenionok'-nak nevezzük. Az argininium ion, más kationos speciesek és ezek különböző ellenionjai kombinációját .argininium iont tartalmazó puffer rendszer'-ként jelöljük. Ellenionként olyan gyógyászatilag elfogadható ionok alkalmazhatók, amelyek a készítmény euteptikus és összeesési (collapse) hőmérsékletét úgy tudják beállítani, hogy a készítmény különösen alkalmassá váljon liofilizálásra. Ilyen ellenionok például az acetát, foszfát, citrát, szukcinát, szulfát, tartarát, maleát, karbonát ionok, és ezek funkcionális 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
