200070. lajstromszámú szabadalom • Eljárás napraforgó regenerálására embriogenezissel
9 HU 200070 B 10 tünk, 0,1 mg/1 BAP-t tartalmaz, ami 0,44 uM-nak felel meg. Az embriókat világosban neveljük 3 hétig, és csíranövényekké fejlődnek. A 2-5 cm magasságú csiranövényeket 5 ezután áttesszük a harmadik közegre, hogy megindítsuk a gyökérképzódést. A harmadik közeg, amelyet a fent leírt módon készítettünk, előnyösen 10 g szacharózt tartalmaz. Gélesített közeg esetén 1 g/1 aktív szén 10 hozzáadása megszünteti az előző közegből származó BAP maradék hatását (Maene és Debergh: Plant Cell Tissue Organ Culture, 5, 23-33 /1985/), és serkenti a gyökerek gyors növekedését. Körülbelül 2 hét után a csira- 15 növényeket áttehetjük talajba. Ha a csíranövények elkezdtek gyökeret ereszteni a második közegen, érintkezésbe hozhatjuk őket a harmadik folyékony közeggel, a Chandler ^s Beard által leirt technika- 20 val (Crop. Sei., 23., 1004, /1983/). Ez a megoldás lehetővé teszi a gyökérzet jelentős fejlődését és elkerüli a gyökerek sérülését, amikor a növényeket a talajba visszük át. 4, példa Helinanthus annus HA 89 változatának éretlen embrióit eltávolítjuk, amikor elérik a 30 0,1-0,5 mm-es méretet és az endospe'rmiummal együtt első közegre helyezzük. Az első közeg 90 g/1 szacharózt és 0,5 mg/1 (megfelel 2,2 juM-nak) BAP-t tartalmaz. 3 hétig sötétben tartás után a szomatikus embriókat el- 35 különítjük és friss első közegre helyezzük, még mindig sötétbe. Az elkülönített embriókon másodlagos szomatikus embriók képződnek. 3 hét sötétben tartás után a másodlagos szomatikus embriókat elkülönítjük és a második közegre helyezzük. A második közeg 30 g/1 szacharózt és 0,1 mg/1 (0,44 juM) BAP-t tartalmaz. A kifejlődő csíranövényeket ezután átlesszük folyékony vagy gélesített harmadik közegre, hogy gyökerezzenek. Ezután áthelyezhetek talajba. ■r>. példa Helianthus armuus HA 89 változatának éretlen embrióit 21 nappal a beporzás után eltávolítjuk; 5 min méretűek. Elválasztjuk őket a burkuktól, és mielőtt az első közegre helyezzük, hosszában négy egyenlő részre vágjuk két sik mentén, amelyek merőlegesek egymásra és párhuzamosak a gemmula-radieuln tengellyel. Ebben az esetben az első közeg 90 g/1 szacharózt és 1 mg/1 BAP-t tartalmaz. 3 hét sötétben tartás után a szomatikus embriókat elkülönítjük, és második közegre helyezzük. A második közeg 30 mg/1 szacharózt és 0,5 mg/1 BAP-t tartalmaz. A kifejlődő csíranóvényeket ezután áttehetjük folyékony vagy gélesített harmadik közegre, hogy gyökerezzenek, majd talajba. Azokat a csíranövényeket, amelyek nem eresztettek gyökeret, beojthatjuk fiatal növényekbe a Habermann és Wallace által leirt módszer (Amer. J. Bot., 45., 479, /1958/) szerint. 6-27. példák Az alábbi példák bemutatják azoknak a kombinációknak egy-egy részét, amelyek a különböző leírt eljárásokkal megvalósíthatók. Példa száma Változat Méret (mm) Szétdarabolás I. Tápközeg közeg Szacharóz W BAP (mg/1) II. Tápközeg közeg Szacharóz (%) BAP (mg/1) gyökereztetés 6. T 76 1,5 modMS’ 9 1 modMS’ 3 1 modMS* +3% szacharóz 0,5 BAP 7. T 76 1,5-modMS’ 9 1 modMS* 3 1 III SC 8. T 76 1,5-modMS’ 9 1 modMS* 3 1 III L 9. T 76 1,5-MS 9 1 MS 3 1 III SC 10. T 76 1,5-MS 12 0,5 MS 3 0,1 III SC 11. T 76 1,5-MS 12 0,5 MS 3 0,1 III L 12. T 76 1,5 supMS ** 9 0,5 MS 3 0,1 III SA 0,1 13. T 76 £3-MS 9 0,5 MS 3 0,5 III SC 14. T 76 <.3-MS 9 0,5 MS 3 0,5 III L 15. T 76 =5 + MS 9 0,5 MS 3 0,5 III SC 16. T 76 =5 + MS 9 0,5 MS 3 0,5 III L 7
