199882. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, vazopresszin antagonista hatású, polipeptidek és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199882 B 2 kalmazó reagáltatás. Mindegyik felsorolt szintézis-eljárás szerepel a Peptide Synthesis, M. Bodanszky, John Wiley, 1976,191. old és 3. Táblázat, 116—121. old. szakirodalmi helyen. A kapcsolási reakciókat általában vizes közegben vagy szerves oldószerben folytatjuk le a reakció befejeződéséig. Az előnyős oldószerek közé tartoznak a dimetil-formamid, a dimetil-acetamid, a metilén-klorid, az acetonitril és ezek kombinációi. A reagáltatást általában szobahőmérsékleten végezzük hfg oldatban, vagy minimálisra csökkentsük a lineáris reakciókat. Különösen alkalmas ciklizálószer a difenil-foszforil-azid (DPPA). A (II) általános képletű lineáris pepiidet száraz dimetil-formamidban és trietil-aminban szobahőmérsékleten DPPA-felesleggel kezeljük, amíg a vékonyrétegkromatográfiás ellenőrzés a reakció teljes befejeződését nem mutatja. A kívánt terméket bepárlással különítjük el, majd gélszűréssel és nagyteljesítményű folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk. A (II) általános képletű lineáris peptidek gyantahordozós peptidláncát általában lépésenként építjük fel a B egységből kiindulva, a lineáris termék 6-helyzetű egységeként szereplő új Pas egységeken át az X egység felé haladva. Minden egységet a peptidkémiában ismert, és az alábbiakban szereplő módon megfelelően védünk. Az egymás után következő reakciólépéseket célszerűen Beckman 990B peptid-szintetizátorban vagy ezzel egyenértékű berendezésben végezzük anélkül, hogy az egyes peptid köztitermékeket izolálnánk. Az eljárás részleteit a leírás későbbi helyén szereplő példákban ismertetjük. A különböző aminosavakat, amelyeket a gyanta hordozóhoz kötött lánchoz adunk, ismert módon védjük. A Boc védőcsoportot például aminosavak, különösen a-aminosavak védelmére, az adott esetben helyettesített benzilcsoportot a karboxilcsoportok és a Pas egység védelmére, a tozilcsoportot az Arg, HArg és MeArg egységek védelmére, az adott esetben helyettesített benzil-oxi-karbonil-csoportot (Z) a Tyr és Lys egységek védelmére használjuk. Védőcsoportként célszerűen olyan csoportokat választunk, amelyek enyhe savas kezeléssel, például a Boc csoport eltávolítására alkalmas kezeléssel, nem távolíthatók el könnyen. Inkább olyan csoportokat alkalmazunk, amelyek hidrogén-fluoriddal, nátrium és folyékony ammónia alkalmazásával vagy benzil-oxi-karbonil-csoport esetén - katalitikus hidrogénezéssel távolíthatók el. A lineáris (II) általános képletű gyanta-hordozós pepiidet gyakran több szintézis-lépésben állítjuk elő, hogy az oligopeptid köztitermékeket a lánc előzőekben leírt módosításával jó hozammal kapjuk. A gyanta hordozón felépített pepiidet vízmentes hidrogén-fluorid felesleggel és megfelelő megkötő vegyülettel, például anizollal kezelve a (II) általános képletű lineáris pepiidet jó hozammal nyerjük. Az (I) általános képletű vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy egy adott esetben védett (II) általános képletű vegyúletet - a képletben X, P, A és B jelentése az előzőekben megadott — ciklizálunk, majd kívánt esetben a kapott — Pas(OH) vagy -P(OH) terminális csoportot tartalmazó olyan (I) általános képletű vegyületet, ahol X és P jelentése a fentiekben megadott, A jelentése vegyértékkötés, B jelentése hidroxilcsoport, adott esetben jelenlévő savcsoportján védett H-P-A-B vagy H-A-B általános képletű vegyülettel — ahol P, A és B jelentése a fentiekben megadott — kondenzálunk és adott esetben a védőcsoportosa)! lehasítjuk. Az (I) általános képletű vegyületek előállításának és ezzel biológiai hatásosságuk felismerésének kulcsa a 6,6-spirocikloalkilén-2-amino-szuberinsav hozzáférhetővé válása, amely vegyületet a peptidszintézisnél, illetve a (II) általános képletű köztitermék szintézisénél alkalmazunk. Korábban előállították már a 2-amino- és a 2,7- -diamino-szuberinsavat, az előállítási eljárás kulcslépése egy Kolbe-elektrolízis volt [Id. R. Nutt és mtsai, J. Org. Chem. 45 3078 (1980)]. A kívánt 2-amino-szuberinsav 6,6-helyzetében lévő nagy terjedelmű spirocikloalkilén helyettesítő jelenléte miatt sem a (II) általános képletű lineáris peptidek előállítása, sem az ezeken végrehajtandó gyűrűzárás megvalósíthatósága nem volt előre látható a találmány kidolgozása előtt. A 6,6-spirocikloalkilén-2-amino-szuberinsavszármazékok szintetikus előállítása során i) egy terminálisán telítetlen szénhidrogénláncot viszünk rá egy cikloalkilén-karboxilát spiro szénatomjára, ii) a karboxilátot homologizáljuk, iii) az oldallánc telítetlen centrumát funkciós csoporttá alakítjuk, iv) ebből aminosavat készítünk. Az előállítási eljárás részleteit az 1. példában mutatjuk be. A spirocikloalkilén-2-amino-alkándisav köztitermék a (III) általános képlettel jellemezhető. A képletben R és R1 jelentése hidrogénatom vagy karboxil védőcsoport és R' jelentése hidrogénatom vagy amino védőcsoport. A (III) általános képletű vegyületben a karboxil csoportokat védő R és R1 csoportok a peptidkémiában jól ismert csoportok lehetnek, például az előzőekben hivatkozott Peptide Synthesis szakirodalmi hely 49—57. oldalán ismertetettek. Ilyen csoportok többek között az 1 — 8 szénatomos alkilcsoportok, a benzilcsoportok, a benzhidrilcsoportok, a feniicsoportok, amelyek mind észterszármazékokat alkotnak, de amelyek szakember számára ismert módon eltávolíthatóak. Előnyösen szelektív eltávolítási eljárások alkalmazandók a (II) általános képletű lineáris peptid kialakítása után. Ugyancsak jól ismertek a (III) általános képletű vegyületek R2 amino védőcsoportjai. Ilyenek az előzőekben hivatkozott Peptide Synthesis szakirodalmi heyl 18—48. oldalán találhatók. Különösen alkalmas amino védőcsoportok a benzil-oxi-karbonil-, a t-butoxi-karbonil-, a p-to-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
