199878. lajstromszámú szabadalom • Eljárás acilezett splenopentinek és a vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199878 B 2 9. példa Mono-, di- és triacetil--splenopentinek (mono-, di- és triacetil-SP5). monoacetil-(N^Arg)-SP5, diacelil-(N—-Arg, N--Lys)-SP5, triacetil-(N--Arg, N--Lys-Q-Tyr)-SP5 elválasztása 150 mm hosszú és 9 mm átmérőjű oszlopra (V * 9,54 ml), amelyben hordozóanyagként valamely 50 mikron és 90 mikron közötti szemcseméretű karboxilezett kationcserélő található, 50 mg ekvimoláris arányú mono-, di- és triacetil-SP5 keveréket viszünk fel. Az anyagok eluálását 5 ml/óra áramlási sebességgel lí,5% etanollal pH/ 2,45-nél (ecetsav) végezzük. Az anyagok sorrendje mono-, di- és triacetil-SP5, R > 1, a reprodukálhatósági ráta nagyobb, mint 95% az egyes anyagoknál. *A triacetil-splenopentinek előállítását lásd a "Peptides 1988" — Proceedings of the 20th European Symposium, September 4 — 9, 1988, Tübingen, S. 745 bis 747." irodalmi helyen. 10. példa Monoacetil-(N£-Arg)-SP5 és monoacetil-(Ni-Lys)SP5 elválasztása 200 mm hosszú és 9 mm átmérőjű oszlopra (V = 12,7 ml), amely hordozóanyagként 40 mikron és 50 mikron közötti szemcseméretű karboxilezett kationcserélőt tartalmaz, ekvimoláris mennyiségű monoactil-(Na-Arg) -SP5-öt és monoacetil-(Nt-Lys)-SP5-öt viszünk fel. Az eluálást vizes futtatószerrel végezzük 2,35-ös pH ér léknél (HC1) 10 ml/óra áramlási sebességgel. Az anyagokat polaritásuknak megfelelően (1. monoacelil-(Na-Arg)-SP5, 2. monoacetil-(N€-Lys)-SP5) 97%-os reprodukálhatósággal eluáljuk. A rezolució 1,5. 11. példa Triacetil—(N--Arg, NT-Arg, N--Lys)-SP5 és diacetil-(Ng.-Arg. N^-Lys)-SP5 elválasztása 200 mm hosszú és 5 mm átmérőjű oszlopra, amely hordozóanyagként 50 mikron és 60 mikron közötti szemcseméretű karboxilezett kationcserélőt tartalmaz, felvisszük a keveréket, amely mindkét peptidből 5 mg-ot tartalmaz. Az eluálást 3 ml/óra áramlási sebességgel, 11,5% etanollal, pH= 2,57 értéknél (ecetsav) végezzük. Az egyes anyagokra értett 96%-os reprodukálhatósággal 0,8 rezolúciót érünk el. 5 * A triacetil-splenopentinek előállítását lásd a "Peptides 1988" - Proceedings of the 20th European Symposium, September 4 - 9, 1988, Tübingen, S. 745 bis 747." irodalmi helyen. 10 12. példa A 4. példa szerint előállított acilezett splenopentinek szintézis nyerstermékének elválasztása A nyerstermékben található anyagok: 1. monoacetil-(Nu-Arg)-SP5, 15 2. diacetil-8(Na-Arg, N£-Lys)-SP5 (főtermék, nagynyomású oszlopkromatográfia szerint 75%), 3. triacetil-((Nü!-Arg,N'T-Arg, N€-Lys)-SP5, 4. triacetil-(Na-Arg, NÉ-Lys-Ó-Tyr)-SP5, 2o 5. diacetil-(Na-Arg, N‘-Lys, D-Tyr)-SP5. 60 cm hosszú és 10 cm átmérőjű oszlopra, amely hordozóként 4,5 liter 50 mikron és 90 mikron közötti szemcseméretű karboxilezett kationcserélőt tartalmaz, felvisszük 35 g spleno- 25 pentin szintézis nyerstermék 150 ml eluálószerrel készített oldatát. Az anyagkeverék elválasztását izokratikus eluálással, 10%-os etanollal, j)H = 2,5-nél (ecetsav), 80 ml/perc áramlási se bességgel végezzük. A frakcionált eluátumot 266 30 mm-nél mérjük. Végül a csúcstérfogatokat egyesítjük, szárazra pároljuk, és liofilizáljuk ekvimoláris mennyiségű sósav hozzáadásával. Összes reprodukálhatósági ráta: 95,6%. Főtermék: 19 a (54,3%). 35 A nagynyomású folyadékkromatográfiával a főtermék tisztasága 98,5%. 40 13. példa Vírusos infekció kezelése 45 3.1. táblázat DAC-SP5 kezelés hatása Balb/c-egerek halálozási aránya A/PR/8/34 influenzavírussal történt infekció (intranazális) után (n = 10-12) lnfekciós dózis (L.D50) 10! 102 103 104 105 Halálozási arány 6 nap után % -ban: Kontroll 50 66,6 100 100 100 DAc-SP5-terápia az infekció alatt+/ 33,3 33,3 66,6 100 100 DAc-SP5 infekció előtt++/ n.g. n.g. n.g. 100 100 9
