199869. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2'-fluor-nukleozidok és ilyeneket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199869 B 2 den esetben az (I) általános képletű vegyületeket jelenti. 1. példa 2-amÍno-6-(ciklopropil-amino)-9-(2-dezoxi-2--fluor-/?-D-arabino-furanozil)-9H-purin a) 2-amino-6-(ciklopropil-amino)-9H-purin-hidroklorid 4,6 g (27,5 mmól) 2-amino-6-klór-purint és 12,5 (220 mmól 8 ekvivalens) ciklopropil-amint 100 ml metanolban 50 °C hőmérsékleten 18 órán át melegítünk, hozzáadunk 50 ml 2-meloxi-etanolt és a reakciókeveréket további 6 órán át 70 •Ç hőmérsékleten melegítjük. Ezután lehűtjük, a kis mennyiségű nem reagált kiindulási anyagot leszűrjük, a szűrletet betöményítjük és szilikagélen kromatografáljuk (5 — 10% metanol tartalmú kloroform). A terméket ezután kétszer metanolból majd egyszer etanolból átkristályosítjuk és hidroklorid sóvá alakítjuk, mennyisége 1,45 g (23%), op.: 253- 257 °C. Elemanalízis a CgHioN6xHClx2,25H2 összegképletű vegyülelre: számított: C: 41,57, H: 5,01, N: 36,35, Cl: 15,34%, nyert: C: 41,55, H: 5,01, N: 36,28, Cl: 15,00%. b) 2-amino-6-(ciklopropil-amino)-9-(2-dezoxi-2-fluor-/?-D-arabino-furanozil)-9H-purin 0,5 g (2,2 mmól) 2-amino-6-(ciklopropil-amino)-purin hidrokloridot és 0,5 g (1,9 mmól) 1- -(2-dezoxi-2-fluor-/?-D-arabinofuranozil)-timint feloldunk 6 ml 5 mmól-os kálium-foszfát pufferban (pH = 7), amely még 0,04 t% kálium-azidot is tartalmaz. Az oldat pH értéke 6,8-re beállítjuk kálium-hidroxid segítségével majd timidin-foszforilázt (16000 l.U.) és purin nukleozid foszforilázt (5500 l.U., T.A. Krenitsky et al„ Biochemistry, 20: 3615,1981 és 4.381.444. számú Egyesült Államokbeli szabalmi leírás) adunk hozzá és a reakciókeveréket 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk. 20 nap elteltével a keveréket szűrjük, a szűrlethez metanolt adunk, a kiváló proteint szűréssel elválasztjuk. A szűrletet egymást követően AGlX2-hidroxid töltetű oszlopon majd szilikagél töltetű oszlopon tisztítjuk. Az AGlX2-hidroxid töltetű oszlopon az eluálást vízzel, a szilikagél töltetű oszlopon az eluálást először acetonitril/víz = 95/5 eleggyel, majd kloroform/metanol/vfz = 85/15/1,5 eleggyel végezzük. A termék mennyisége liofilizálás után 0,045 g és hidrát formájában képződik. Elemanalízis a C^H^FN,/^ x HjO összegképletű vegyületre: számított: C: 45,61, H: 5,59, N: 24,55%, nyert: C: 45,80, H: 5,54, N: 24,43%. A termék szerkezetét *H-NMR spektrummal igazoltuk (adatokat lásd később). 2, példa 2- amino-9- ( 2-de zoxi- 2- fluor- 0-D-arabino- furanozil)-9H-purin 0,4 g (2,4 mmól) 2-amino-6:mctoxi-purint (előállítása: R. W. Balsiger ét J. A. Montgomery: J. Org. Chcm., 20: 1573, 1960) és 0. 4 g (1,5 mmól) l-(2-dezoxi-2-fluor-/l-D-arabinofuranozil)-timint (C. H. Tann et al.. J. Org. Chem., 50: 3647, 1985) 20 ml 5 mmólos kálium-foszfát pufferben (pH = 7) szuszpendálunk, amely még 0,04 t% azidot is tartalmaz. A szuszpenzió pH értékét 7-es értéken tartjuk kálium-hidroxid adagolásával. Ezután a reakciókeverékhez timidin foszforilázt (12000 l.U.) és purin nukleozid foszforilázt (16600 I.U., T.A. Krenitsky et al„ Biochemistry. 20: 3615, 1981 és a 4.381.444. számú Egyesült Allamok-beli szabadalmi leírás) adagolunk és 37 °C hőmérsékleten keverjük. A 3. napon további 8000 l.U. timidin foszforilázt és 11100 l.U. nukleozid foszforilázt adagolunk. A 15. napon a reakciókeveréket 200 ml-re hígítjuk 5 mmólos kálium-foszfát puffer adagolásával, amely még 0,05% kálium-azidot is tartalmaz. A reakciókeverék pH-ját 7-re beállítjuk kálium-hidroxid adagolásával és még 8000 1. U. timidin foszforilázt és 11100 LU. purin nukleozid foszforilázt adagolunk hozzá. 20 nap elteltével a reakciókeverék pH-ját ismételten kálium-hidroxiddal 7,2 értékre beállítjuk és 8000 l.U. timidin foszforilázt és 11100 purin nukleozid foszforilázt adagolunk hozzá, majd a 43. napon 0,2 g l-(2-dezoxi-2-fluor-/?-D-arabino-furanozil)-9H-timint adagolunk. A reakciókeverék pH-ját 10 mmólos H3PO4 adagolásával 6,9-re beállítjuk és 8000 l.U. timidin foszforilázt és 2800 l.U. purin nukleozid foszforilázt adagolunk. A 63. napon a szuszpenziót szűrjük, a szűrletet betöményítjük, a visszamaradó anyagot jégben és vízben oldjuk, hozzáadunk 2 térfogatrész metanolt a protein kicsapására. A szuszpenziót szűrjük és a szűrletet betöményítjük. A visszamaradó anyagot vízben feloldjuk és 2,5x8 cm méretű AGlX2-hidroxid töltetű oszlopra adagoljuk, vízzel majd melanol/víz= 1/1 eleggyel átmossuk és a terméket metanol/víz = 9/1 eleggyel eluáljuk. A kívánt vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot kloroform/metanoi/víz = 9/10/0 elegyben oldjuk és 2,5x55 cm méretű szilikagél oszlopra feladjuk. Az oszlopról a terméket kloroform/metanol/ /víz= 90/10/1 eleggyel eluáljuk, a terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A visszamaradó anyagot vízben oldjuk, és liofilizálás után 0,021 g cím szerinti vegyületet nyerünk, amely 0,5 hidrát formájú. Elemanalízis a C11H14FN5O4O x 5H2O öszszegképletű vegyületre: számított: C: 42,86, H: 4,90, N: 22,72%, nyert: C: 42,92, H: 4,93, N: 22,61%. A termék szerkezetét 'H-NMR spektrummal igazoltuk (adatokat lásd később). 3. példa 2-amino-9-(2-dezoxi-2-fluor-0-D-arabino-furanozil)-9H-purin 0,5 g (2,8 mmól) 2-amino-6-etoxi-purint (előállítása: R. W. Balsiger és J.A. Montgomery J. Org. Chem., 25:1573,1960) és 0,5 g (1,9 mmól) l-(2-dczoxi-fluor-/3-D-arabinofuranozil)-timint . 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
