199867. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 5-szubsztituált pirimidin-nukleozidok előállítására
1 HU 199867 B 2 (a) hatóanyag (b) mikrokristályos cellulóz (c) laktóz BP (d) etil-cellulóz E példa Injektálható készítmény ms/kapszula 250 125 125 13 513 Hatóanyag 0,200 g steril, pirogénmentes foszfát puffer (pH = “ 7,0) ad 10 ml. A hatóanyagot a foszfát puffer nagy részében oldjuk (35 — 40 °C), majd a kívánt térfogatra töltjük és steril mikropórusos szűrön steril 10 ml-es üvegfiolába szüljük, végül steril dugóval lezárjuk. F példa Intramuszkuláris injekció Hatóanyag 0,20 g benzil-alkohol 0,10 g Glukofurol 75 1,45 g injekciós víz ad 3,11 ml. A hatóanyagot glikofurolban oldjuk, hozzáadjuk a benzil-alkoholt és oldódás után vízzel 3 mire töltjük. Az elegyet steril mikropórusos szűrőn szűrjük és steril 3 ml-es üvegfiolába töltjük. G példa Szirup szuszpenzió Hatóanyag 0,2500 g szorbitol oldat 1,5000 g glicerol diszpergálbató 2,0000 g cellulóz 0,0750 g nátrium-benzoát ízesítőanyag, 0,0050 g Peach 17.42.3169 0,0125 ml desztillált víz ad 5,0000 ml A nátrium-benzoátot a desztillált víz egy részében oldjuk és hozzáadjuk a szorbitol oldatot. A hatóanyagot hozzáadjuk és diszpergáljuk. A glicerolban diszpergáljuk a vastagítószert (diszpergálható cellulózt). A két diszperziót elegyítjük és desztillált vízzel a kívánt térfogatra töltjük. Fokozott kenőhatáshoz további vastagítószert adagolunk. H példa Szuppozitórium mg/szuppozitórium Hatóanyag (63 pm)* 250 Kemény zsír BP (Witepsol H15, Dynamit NoBel) 1770 2020 * - A hatóanyagot poralakban használjuk, amely legalább 90%-ban legfeljebb 63 ^m szemcseátmérőjű. A Witepsol H15 1/5-öd részét gőzfűtéses edényben 45 °C hőmérsékleten megolvasztjuk. A hatóanyagot 200 /im-es szűrőn átszitáljuk, az olvadékhoz adjuk és egyenletes diszperzióvá keverjük. A hőmérsékletet 45 °C értéken tartva hozzáadjuk a szuszpenzióhoz a maradék Witepsol H15-öt és homogén keverékké keverjük. A szuszpenziót 250 |xm-es rozsdamentes acélszitán átszűrjük és keverés közben hagyjuk 40 °C hőmérsékletre hűlni. 38 — 40 °C közötti hőmérsékleten 2,02 g keveréket megfelelő műanyag mintába öntjük. A szuppozitóriumot hagyjuk szobahőmérsékletre hűlni. I pesszárium Pesszárium mg/pesszárium Hatóanyag (63 /*m) 250 Vízmentes dextróz 380 Burgonyakeményítő 363 Magnézium-sztearát 7 1000 A fenti komponenseket közvetlenül összekeverjük és közvetlen préseléssel pesszáriumot készítünk. Vírus elleni hatás és toxieitás mérése Humán citometalovírust (HCMV) vizsgálunk egyrétegű MRC5 sejteken (humán embrió tüdősejtek) vagy Detroit 532 sejtekben (humán fityma kötőszöveti sejtek). A hatóanyag aktivitását a vértestek számának csökkenésével vizsgáljuk, amelynek során az egyrétegű sejtet HCMV szuszpenzióval fertőzzük, majd a vírusnak a tenyészeten történő elterjedésének megakadályozására gélformájú agaróz táptalajjal fedjük le. Különböző koncentrációjú hatóanyagot adagolunk a felső agaróz tápréteghez. A vértestek számát minden hatóanyagkoncentrációnál a kontroll százalékában fejezzük ki és dózisfüggő görbén ábrázoljuk. Erről a görbéről az 50%-os gátló hatáshoz szükséges koncentrációt (IC30) határozzuk meg. MRC5 sejteken hasonló módon varicella zoster vírust (VZV) vizsgálunk, azzal a különbséggel, hogy az agaróz fedőréteget elhagyjuk. A következő vizsgálathoz vírustermelő sejteket (P3HR — 1) 14 napon keresztül a hatóanyaggal kezelünk, majd a sejtenkénti EBV genom másolat számát EBV specifikus c-RNS-DNS hibridizációval határozzuk meg. Nonoyama és Pagano módszerével (Nature: New Biology Vol. 233, 103 — 104 /1971/) Epstein-Barr vírust vizsgálunk. A megadott IC$o értékek az EBV genom sejtenkénti számának 50%-os csökkenéséhez szükséges koncentrációt jelölik. Sejttoxicitást vizsgálunk a sejtfejlődés gátlásának mérésével. Verő sejtek egybefüggő tenyészetét különböző koncentrációjú hatóanyaggal kezeljük és a sejtek életképességét naponta vizsgáljuk tetrazólium festés (MTT) segítségével. A sejtek életképességének 96 órán keresztül történő 50%-os csökkenéséhez szükséges koncentrációt CCID50 érték alakjában adjuk meg. A mérési eredményeket az alábbi táblázat tartalmazza: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
