199784. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-acil-pirrolidin-származékok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199784 B 2 chotikumként melegvérű állatoknál és embereknél. Az új hatóanyagokat intravénásán, szubkután vagy orálisan adagoljuk önmagukban vagy más, a központi idegrendszert befolyásoló anyagokkal kombinálva. A dózist a kezelt betegség típusa és súlyossága határozza meg, értéke általában 0,01-20 mg/kg, előnyösen 0,01-10 mg/kg testtömeg naponta. Súlyos esetben a dózis emelhető, mivel toxikus tulajdonságokat eddig nem észleltünk. Az új hatóanyagok megfelelő gyógyszerkészítmények formájában adagolhatok. Orális adagoláshoz a hatóanyagot szokásos adalékanyagokkal, így hordozóanyaggal, stabilizátorral vagy inert hígítószerrel keverjük, és a szokásos módon megfelelő adagolási formára, így tablettává, drazsévá, kapszulává, vizes, alkoholos vagy olajos szuszpenzióvá vagy vizes, alkoholos vagy olajos oldattá alakítjuk. Inert hordozóanyagként alkalmazható például gumiarábikum, magnézium-karbonát, kálium-foszfát, tejcukor, glükóz vagy keményítő, elsősorban kukoricakeményítő. A készítmény előállításához alkalmazható száraz vagy nedves granulálás. Olajos hordozóanyagként vagy oldószerként alkalmazhatók növényi vagy állati olajok, így napraforgóolaj vagy csukamájolaj. Szubkután vagy intravénás adagoláshoz a hatóanyagot adott esetben segédanyag, így oldásközvetítő, emulgeátor vagy más segédanyag felhasználásával oldattá, szuszpenzióvá vagy emulzióvá alakítjuk. Oldószerként alkalmazható például víz, fiziológiás konyhasóoldat vagy alkohol, így etanol, propán-diol vagy glicerin, valamint cukoroldat, így glükóz- vagy mannitoldat, valamint ezek elegyei. A találmány szerinti eljárást közlebbről az alábbi példákkal világítjuk meg anélkül, hogy az oltalmi kör a példákra korlátozódna. 1 1. példa N-(N-Benzil-oxi-karbonil-S-prolil)-2S-trifluor-acetil-pirrolidin a) N-(N-Benzil-oxi-karbonil-S-prolil)-2S-(l-hidroxi-2,2,2- ínfluor-etilfpirroüdin 1,65 g N-benzil-oxi-karbonil-S-prolil-S-prolinál és 0,65 g cinkpor 15 ml dimetil-formamidban felvett elegyét 20°C hőmérsékleten ultrahanggal történő besugárzás közben 10 g trifluor-jód-metánnal elegyítjük. 5 óra elteltével 100 ml 0,1 n vizes sósavat adunk hozzá, etil acetáttal extraháljuk az egyesített etil-acetátos fázisokat vízzel háromszor mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. Kieselgélen etilacetát/ciklohexán 4:1 eleggyel kromatografálva 0,6 g cím szerinti vegyületet kapunk olaj formájában. 1 H-NMR(CDC13): 6=7,4-7,3 (m, 5H); 5,5-4,9 (m, 2H); 4,7^4,4 (m, 1H); 4,3-4,1 (m, 1H); 4,0-3,2 (m, 5H); 2,4-1,8 (m, 8H) ppm. b) N-(N-Benzil-oxi-karbonil-S-prolil)-2S-trifluoracetil- pirrolidin 0,25 ml dimetil-szulfoxidot -78°C hőmérsékleten 0,15 ml oxalil- klorid 20 ml diklór-metánban felvett oldatához adagolunk. 20 perc elteltével 0,6 g la) példa szerinti anyagot adunk hozzá, 15 percen keresztül keverjük és 1,05 ml trietil-amint adunk hozzá. További 5 perc elteltével szobahőmérsékletre melegítjük, vízzel, 0,1 n vizes sósavval, 10 tömeg%-os vizes nátrium-karbonát oldattal és vízzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. Kieselgélen kromatografálva 0,395 g cím szerinti vegyületet kapunk olaj formájában. >H-NMR(CDCl3): 5= 7,4-7,2 (m, 5H); 5,25-4,9 (m, 3H); 4,7-4,1 (m, 2H): 3,8-3,4 (m, 3H); 2.4- 1,5 (m, 8H) ppm. 2. példa N-[4-(4-Metoxi-fenil)-butiril]-2S-trifluor-acetil-pir rolidin a ) N-[4-(4-Metoxi-fenil)-butiril]-2S-(l -hidroxi-2,2,2-trifluor- etil)-pirrolidin 1,38 g N-[-4-(4-metoxi-fenil)-butiril]-S-prolinál és 0,65 g cinkpor 15 ml dimetil-formamidban felvett elegyébe 20“C hőmérsékleten ultrahanggal történő besugárzás közben 6 g trifluor-jód-metánt vezetünk. 1 óra elteltével a reakcióelegyet az la) példában leírt módon feldolgozzuk. Kieselgélen etil- acetát/ciklohexán 2:1 eleggyel kromatografálva a cím szerinti vegyület két izomerét kapjuk 2,5:1 arányban. 1. izomer: ‘H-NMR (CDCI3): 5=7,2-6,6 (m, 4H); 5.5- 4,9 (m, 1H); 5.0- 4,0 (m, 1H); 3.8 (s, 3H); 3.6- 1,6 (m, 10H)ppm. 2. izomer: ‘H-NMR (CDCI3): 6=7,2-6,6 (m, 4H); 6.0- 5,5 (m, 1H); 4.6- 4,3 (m, 1H); 3.8 (s, 3H); 4.0- 3,2 (m, 2H); 3.0- 1,7 (m, 10H) ppm. b) N-[4-(4-Metoxi-fenil)-butiril]-2S-trifluor-acetilpirrolidin Az lb) példában leírt módon eljárva 160 mg 2a) példa szerinti vegyületből 110 mg cím szerinti vegyületet kapunk olaj formájában. ‘H-NMR (CDCI3): 5=7,2-6,6 (m, 4H); 5,3-4,9 (m, 2H); 4.7- 4,2 (m, 1H); 3,8 (s, 3H); 3,6-1,6 (m, 10H) ppm. A prolil-endopeptidáz aktivitás in vitro vizsgálatához prolii- endopeptidázt állítunk elő, úgy, hogy patkány agyi szövet extraktum 1 tömegegységét 5 térfogatrész puffer eleggyel (50 mmól/1 nátrium-foszfát puffer (pH=7,2), 1 mmól/1 EDTA és 2 mmól/1 ditiotreitol) Ultraturrax homogenizálóban 4°C hőmérsékleten homogenizáljuk. Az extraktumot 60 percen keresztül 100000 g mellett centrifugáljuk és a kapott felülúszót alkalmazzuk az enzimaktivitás meghatározásához. A prolil-endopeptidáz aktivitást fluorometriás módszerrel (Kató és munkatársai: J. Neurochem. 35, 527-535 (1980)) mérjük. A mérés alapelve, hogy meghatározzuk a 7-(N-szukcinil-glicil-prolil)-4- metil-kumarin-amid (szukcinil-Gly-Pro-MCA) fluorogén szubsztrátum enzimatikus hasításával felszabadított 7-amino4-metil-kumarin (7-AMC) fluoresszenciáját. A vizsgált elegy (össztérfogat 200 pl) 124 pl 50 mmól/1 nátrium-foszfát puffert (pH=6,8), 1 mmól/1 EDTA- t, 2 mmól/1 ditiotreitolt tartalmazó elegyből, 6 pl enzim oldatból és 20 pl hatóanyag oldatból áll. Ezt 2 percen keresztül 37°C hőmérsékleten inkubáljuk, majd 50 pl 2 mmól/1 szubsztrátum oldat hozzáadásával indítjuk az enzim reakciót. A reakcióelegyet 10 percen 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
