199694. lajstromszámú szabadalom • Eljárás daganatellenes hatású, gonadoliberin-származékokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
HU 199694 B 7 8 Nőstény patkányok (DPhe6, Gin8, desGly10)GnRH-etilamiddal való kezelése a kezelési idővel arányos mértékben csökkentette DMBA-val kiváltott, a petefészektől függő emlőrák méretét. A három-hetes kezelési periódus végére a daganatok átlagos térfogata eredeti térfogatuk 10%-ára csökkent. A daganat (D-Phe, Gin8, desGly‘°)GnRH-etilamid által okozott méretcsökkenése mind sebességét, mind mértékét illetően egyenértékű volt akár a sebészeti kasztrálás után 3 héttel megfigyelhető visszafejlődéssel, akár az azokban az állatokban megfigyelhető javulással, amelyek azonos dózisban egy, az előrehaladott emlőrák kezelésére használt emlős GnRH-agonistát: (D-Ser/But/6,Azgly10) -GnRH-t (ICI 118630) kaptak. A (D-Phe6, Gin8, desGiy,0)GnRH-etilamidda! kezelt állatok petefészkeinek hisztológiai vizsgálata és a szteroid nemi hormonok vérszint-meghatározásainak elemzése normális tüszőérést és sárgatest-fejlődést, valamint a petefészek működésének további meglétét mutatta. Habár az ösztradiol keringésbeli koncentrációja csökkent az intakt, kezeletlen kontroliéhoz képest, a csökkenés mértéke nem volt annyira kifejezett, mint a sebészetileg kasztrált állatok esetében. A progeszteron szintjét és a petefészeksúlyt nem csökkentette (D-Phe6, Gin8, desGlyl(5)GnRH-etilamiddal végzett kezelés. Ezzel szemben az ICI 118630 szignifikáns mértékben lassította a tüszőérést, csökkentette a petefészkek súlyát, és mind az ösztradiol, mind a progeszteron plazmabeli koncentrációját a kasztrációs szintre csökkentette. Ezek az adatok azt mutatják, hogy a (D-Phe6, Gln8,desGlyl0)GnRH-etilamid hatékony daganatellenes szer DMBA által kiváltott emlőrák esetében, és ez a daganatgátló hatás nem jár együtt a petefészek működésének teljes gátlásával. 2. példa Humán emlőrák sejtvonal sejtosztódásának gátlása Az MDA MB 231 humán emlőkarcinómábói származó tumoros sejtvonal részletes vizsgálatok eredménye szerint egy ösztrogén-receptor negatív sejtvonal. E sejtvonal sejtjeit 10% FCS-sel (főtális borjúsavóval) kiegészített RPMI médiumban (gyártja: GIBCO (Hoofddorp, Hollandia) tenyésztettük. A kiültetést követően 24 órával a sejteket az exponenciális növekedés fázisában kezeltük 5, 10 és 25 pg/ /ml (D-Phe6, Gin8, desGlyl0)GnRH-etilamiddal 1 pCi 3H-timidin jelenlétében. A sejteket 24 óra hosszat inkubáltuk, majd a médiumot eltávolítottuk, a sejteket kétszer mostuk foszfáttal pufferolt fiziológiás sóoldattal, és 10%os triklór-ecetsavval kicsaptuk. A triklór-ecetsavban oldhatatlan anyagot feloldottuk tömény hangyasavban, és radioaktivitását szcintillációs számlálóval mértük. 5 10 15 20 25 5 (ag peptid 32%-kal, lOpg 65%-kai, 25 pg 71 %-kai csökkentette a 3H-timidin beépülését 106 db/ml sejt savoldhatatlan frakciójába. Ezek az eredmények egyértelműen mutatják, hogy a (D-Phe , Glrr, desGly‘°)GnRH-etilamid gátolja ezeknek az ösztrogéntől nem függő humán emlőrák sejteknek a szaporodását. 3. példa Humán emlőrák sejtvonal sejtosztódásának gátlása MDA-MB 231 humán emlőkarcinómából származó tumoros sejtvonalon a 2. példában leírt kísérleti körülményeknek megfelelően, de 72 órán át tartó inkubációt alkalmazva a következő peptidek sejtosztódást gátló aktivitását vizsgáltuk: (Gin8)-GnRH, (DPhe6, Gin8)-GnRH, (DPhe6, Gin8, desGly'°)GnRH-etilamid, (Trp'.Leu8) -GnRH. Valamennyi pepiidet 10 pg-os dózisban használtuk. A 3H-timidin inkorporációját a fenti peptidek a következő mértékben gátolták: (Gin8)-GnRH 36% (DPhe6,Gin8)-GnRH 60% (DPhe6,Gin8,desGly,0)-GnRH-EA 70% (Trp7, Leu8) -GnRH 38% SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás hatóanyagként (I) általánosképletű 35 Glp-His-Trp-Ser-Tyr-X,-X2-X3-Pro-X4 (i) — ahol X, jelentése glicilcsoport vagy D-feniI-alan: 1- -csoport, X2 jelentése L-leucil- vagy L-triptofii-csoport. 40 X3 jelentése L-glutaminil- vagy L-leucil-csoport és X4 jelentése glicil-amid- vagy etil-amid-csoport, azzal a megkötéssel, hogy amennyiben X2 triptofilcsoportot és X, gliciltől eltérő csopor- 45 tot jelent, akkor X3 csak leuciltól eltérő csoportot jelenthet — gonadoliberin-származékokat, vagy azok savakkal alkotott gyógyászati szempontból elfogadható addíciós sóit vagy jQ fém komplexeit tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az ismert módon előállított hatóanyagot a gyógyszerkészítésben szokásos vivőés/vagy segédanyagokkal összekeverjük és hormonfüggő tumorok kezelésére alkalmas, 55 de hormonális kasztráció okozásától mentes gyógyászati készítménnyé alakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a gyógyászati készítmény 0Q adagolási egységenként 0,0035—350 pg menynyiségü (I) általános képletű vegyületet — ahol X,, X2, X3 és X4 jelentése az 1. igénypont szerinti — tartalmaz szabad formában vagy só vagy fémkomplex alakjában. Rajz nélkül 5
