199559. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A 10255 antibiotikum komplex és faktorai, valamint ezeket tartalmazó készítmények előállítására
HU 199559 B ségű antibiotikum termelődik. Az antibiotikus aktivitás nagy része a micéliumban található, míg kisebb része a tápközegben. Az A10255 komplex a legkönnyebben úgy választható el a fermentléből, hogy a micéliumot (biomasszát) kiszűrjük. A tápközeget rendszerint nem használjuk fel az antibiotikum kinyerésére. Az antibiotikum komplexet a micéliumból izoláljuk. Az NRRL 15537 szülőtörzs főtermékként a B faktort termeli. Az NRRL 18260 mutáns törzs főterméke a B és G faktor. Mindkét törzsnél a C, E, F és H faktorok csak mint melléktermékek keletkeznek. A micéliumot poláris oldószerrel — például aceton/víz, 4:1 arányú elegyével — extraháljuk, az extraktumot betöményítjük, savanyítjuk és szerves oldószerrel — például etil-acetáttal — ismét extraháljuk. A nyert oldatot betöményítjük, hogy az A10255 komplex kicsapódjon. Az A10255 komplex további tisztítás nélkül felhasználható, közvetlenül hozzákeverve az állat táplálékába, vagy takarmány premixébe. Ettől eltérő módon, az A10255 antibiotikum-komplexet tovább tisztíthatjuk, és az egyes faktorokat elválaszthatjuk jól ismert kromatográfiás eljárásokkal, például vékonyréteg-kromatográfiával, oszlopkromatográfiával vagy különösen különféle HPLC eljárásokkal. Az egyes faktorok elválasztásának néhány sajátságos eljárását a későbbiekben tárgyaljuk. Az Ál 0255 komplex termelésénél számos különféle táptalaj használható fel az NRRL 15537, NRRL 18260 vagy az NRRL 15922 törzsek tenyésztésére. Vannak azonban tápközegek, melyek a gazdaságos termelés, az optimális kinyerés, a termék könnyebb kinyerése szempontjából előnyösebbek a többinél. Ezeknek a táptalajoknak asszimilálható szénforrást, nitrogénforrást és szervetlen sókat kell tartalmazniuk. Alkalmas szénforrás lehet a glükóz, keményítő, maltóz, fruktóz és glicerin. A szénforrás optimális koncentrációja 2—5 süly%. Előnyös nitrogénforrás az emésztett szója, savval vagy enzimatikusan emésztett kazein, az ammóniumsók, nitrátsók, glicin, alanin, szerin, aszparagin és glutamin. A mikroorganizmusok növekedéséhez és fejlődéséhez szükséges eszenciális nyomelemek kellő mennyiségben találhatók, mint szennyezések a táptalaj más alkotórészeiben. Előnyös lehet azonban további oldható szer29 vetlen sókat adni a táptalajhoz, melyek nátrium-, kálium-, magnézium-, kálcium-, ammonium, vas-, klorid-, karbonát-, foszfát-, szulfát-, stb., ionokat szolgáltatnak. Noha kis mennyiségű A10255 antibiotikumot rázott-lombikos tenyészetekben is előállíthatunk, nagyobb mennyiségű A10255 antibiotikum előállítására előnyös süllyesztett, aerob tankfermentációt végezni. A tankfermentációnál előnyösen vegetatív oltóanyagot használunk. A vegetatív inokulum előállításához kis térfogatú táptalajt spórával vagy micélium fragmensekkel oltunk be, hogy friss, aktivan növekvő tenyészethez jussunk. A vegetatív inokulumot visszük azután át a nagy. tankfermentorba, ahol alkalmas inkubációs idő elteltével, az A10255 antibiotikum optimális hozadékkal termelődik. Az A10255 antibiotikumot termelő mikroorganizmusok 23—37°C hőmérséklettartományban termelik az A10255 komplexet. Az A10255 komplex optimális termelése 30— 32°C hőmérsékleten történik. Amint az a süllyesztett, aerob tenyészeteknél történik, steril levegőt diszpergálunk keresztül a tenyészeten* A mikroorganizmus kellő növekedéséhez a tankfermentorban percenként átvezetett levegő térfogatának, percenként 100—300 fordulatszámú kevertetésnél, a tápközeg térfogatának egytizede és fele között kell lennie. Egy 165 literes fermentornál, mely 100 liter fermentációs közeget tartalmaz, melyet lapátkerekes keverővei percenként 200 fordulatszámmal keverünk, a percenként átvezetett levegő optimális térfogata a fermentlé térfogatának 0,125-öd részével egyenlő. A fermentlében az antibiotikus aktivitás rendszerint a 40. óra után jelenik meg, és az antibiotikumtermelés csúcsa a 110—140. órára várható. Az A10255 antibiotikum termelését vagy agardiffúziós módszerrel — tesztorganizmusként Bacillus subtilis ATCC 6633 törzset használva —, vagy turbidimetrikus módszerrel — Staphylococcus aureus ATCC 9114 tesztorganizmust használva — követhetjük nyomon. Az A10255 komplex, valamint annak egyes komponensei antimikrobiális hatóanyagok, különösen Gyam-pozitív mikroorganizmusokkal szemben, amint azt a következő in vitro és in vivo vizsgálatok eredményei tanúsítják. 30 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 16
