199559. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A 10255 antibiotikum komplex és faktorai, valamint ezeket tartalmazó készítmények előállítására
HU 199559 B A találmány tárgya eljárás egy új, önkényesen A10255 generikus jelöléssel ellátott antibiotikum előállítására. Az A10255 antibiotikum 6 különálló vegyület vagy faktor — B, C, E, F, G és H faktor — keveréke. A faktorok keverékét egyidejűleg állítjuk elő a Streptomyces gardneri NRRL 15537, NRRL 18260, NRRL 15922 új törzsekkel vagy ezek A10255 antibiotikumot termelő mutánsaival. A mikroorganizmusokat süllyesztett, aerkb körülmények között tenyésztjük, amíg kellő mennyiségű A10255 antibiotikum termelődik. A B, C, E, F, G és H faktorokat kisebb menynyiségben a tápközegből, nagyobb mennyiségben a micéliumból extrahátjuk oldószerekkel. Az együtt termelődő faktorokat keverékként nyerjük ki: az extraktumokat betöményítve, a betöményített oldatot vízzel nem elegyedő oldószerrel extrahálva, az extraktumot bekoncentrálva és a komplexet tartalmazó csapadékot összegyűjtjve és megszárítva. Megjegyezzük, hogy az „antibiotikum-komplex" és az „A10255 komplex" kifejezéseken nem kovalens kötésekkel kötött kémiai komplexeket értünk, hanem, ahogyan ezt a kifejezést az antibiotikumokkal kapcsolatban használják, az együtt termelődő, különálló antibiotikumfaktorok keverékét. Amint az az antibiotikumtermeléssel foglalkozó szakemberek előtt nyilvánvaló, az egyes termelődött faktorok aránya az antibiotikum-komplexben változó a fermentációs körülményektől függően. Az A10255 komplexet tovább tisztíthatjuk, és a B, C, E, F, G és H faktorokat elválasztjuk egymástól különféle kromatográfiás eljárásokkal. Az A10255 komplex és az egyes B, C, E, F, G és H faktorok gátolják az emberi és az állati kórokozó mikroorganizmusok növekedését. Az A10255 komplex és az egyes faktorai ezenkívül fokozzák a csirkéknél és a szarvasmarháknál a tápanyaghasznosítást, gyorsítják a választási malacok növekedését és fokozzák a tápanyaghasznosításukat. Foglalkozik a találmány a biológiailag egységes Streptomyces gardneri NRRL 15537, Streptomyces gardneri NRRL 18260 és Streptomyces gardneri NRRL 15922 törzsekkel vagy a nevezett törzsek A10255 antibiotikumot termelő mutánsaival. A találmány további tárgya az A10255 komplexet vagy az egyes A10255 faktorokat tartalmazó tápkészítmény csirkék, választási malacok és szarvasmarhák részére. A találmány további tárgyát képezik az alkalmas hordozóanyag mellett hatékony mennyiségben A10255 komplexet, A10255B faktort, A10255C faktort, A10255E faktort, A10255F faktort, A10255G faktort vagy A10255H faktort tartalmazó különféle gyógyszerkészítmények. A találmány további tárgya az A10255 komplexet felhasználó eljárás tiosztrepton rezisztenciagénnel rendelkező Streptomyces-ek szelektál ására. Az 1—6. ábrákon az egyes A10255 faktorok kálium-bromid pasztillában felvett infravörös elnyelési spektrumait mutatjuk be: 2 1 1. ábra — A10255B faktor, 2. ábra — A10255C faktor, 3. ábra — A10255E faktor, 4. ábra — A10255F faktor, 5. ábra — A10255G faktor, 6. ábra — A10255H faktor. A főként B, C, E, F, G és H faktorokból álló A10255 komplexet a későbbiekben jellemzett Streptomyces gardneri NRRL 15537, vagy NRRL 18260 törzzsel vagy ezek A10255 komplexet termelő mutánsaival állítjuk elő, oly módon, hogy az említett mikroorganizmusokat asszimilálható szénhidrogénforrást, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó vizes tápközegben tenyésztjük, amíg A10255 komplex termelődik. Amint az több antibiotikumot termelő törzsnél ismereres, az A10255 antibiotikumot termelő S. gardneri NRRL 15537, NRRL 18260 vagy NRRL 15922 törzsek fermentálásakor többféle antibiotikum termelődik egyidejűleg. Az NRRL 15537 tenyészet elsősorban az A10255B faktort termeli, és a C, E, F, G és H faktorok melléktermékként jelennek meg még kinyerhető mennyiségben. A többi jelenlévő faktor vagy olyan kis menynyiségben található, hogy nem érdemes kinyerni, vagy viszonylag nem stabil. A G és H faktorokat az NRRL 18260 tenyészetből izoláltuk, melyben a G faktor a főtermék. Az együtt termelődő faktorok mennyisége bármelyik fent említett mikroorganizmusoknál fermentációról fermentációra változhat. A B, C, E, F, G és H faktorok együtt termelődnek a fermentáció folyamán, és mint keveréket kapjuk meg őket A10255 komplexként. Az egyes faktorokat elválasztjuk egymástól, és az alábbiakban ismertetett fizikai és biológiai tulajdonságaik alapján azonosítjuk őket. A „gyógyászati szempontból elfogadható sók" kifejezés alatt a találmány szerinti vegyületek alkáli és alkáliföldfémsóit, valamint a savaddíciós sóit értjük. Ilyen sók ezek szerint a lítium-, nátrium-, kálium- és kálciumsók, illetve a vegyületek sósavval, hidrogén-bromiddal, kénsavval vagy foszforsavval alkotott addíciós sói. Az alábbiakban ismertetjük az egyes antibiotikum-faktorok fizikai tulajdonságait: A10255B faktor: Nem kristályos, fehér, sárgás-fehér por, ami oldódik dimetií-szulfoxidban, dimetil-formamidban, piridinben, kloroform/metanol elegyében és tetrahidrofurán/víz 4:1 térfoga tarányú elegyében. . Az elemanalízis a következő százalékos összetételt adja (átlag): C: 49,25, H: 3,94, N: 15,65,0:21,36és S:6,73%. A gyors atom bombázású tömegspektrometriával meghatározott látszólagos molekulatömeg: 1244 dalton. A 66%-os vizes dimetil-formamid oldatban végzett elektrometrikus titráció szerint három titrálható csoportot tartalmaz pKa = = 4,9, 11,2 és 12,8 értékekkel. 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
