199558. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükóz izomeráz enzim tisztítására
HU 199558 B tó BTC teljes eltávolítását mutatja. A felülúszó folyadékból kiveszünk egy további alikvot mennyiséget és vízzel tízszeresére hígítjuk. A csapadékképződés elmaradása ennél a csökkentett sókoncentrációnál azt jelzi, hogy aBTC-t eltávolítottuk a gyantával. A folyadék maradékát szűréssel elkülönítjük a gyantától és a szűrletet egy AMICON 201 kevert cellával, egy YM-30 membrán felhasználásával ultraszűrjük a nátrium-klorid maradék eltávolítása végett. A végső ultraszűrési folyadék izomeráz aktivitását és proteink koncentrációját megmérjük. Az izomeráz aktivitás visszanyerése 194000 IGfU volt, vagyis több mint ,90%-a a kiindulási aktivitásnak. A fajlagos aktivitás 40,12 IGIU/mg protein. 8. példa A példa különféle kvaterner és tercier aminok alkalmazását illusztrálja a találmány szerinti eljárásban. A példában mindenben az 5. példában leírtak szerint járunk el. Az alább felsorolt vegyületek alkalmazásával eredményes enzim kicsapódás és a kicsapott aktivitás legalább 80%-ának visszanyerése volt elérhető: MAQUAT MC 1412 C,2_,6 alkil-dimetil-benzil ammónium•klorid BTC-1010 Dodecil-dimetil ammónium-klorid BTC-1100 C,2_14 alkil-dimetil 1-naftil-metil ammónium-klorid Sztearil-dimetil-benzil ammónium-klorid HYAM1NE 3500 C|2—te alkil-dimetil-benzil ammónium-klorid Az alább felsorolt vegyületekkel vagy nem történt enzim kicsapódás: vagy inaktiváció jött létre: VARIQUAT B-200 Benzil-trimetil ammónium-klorid ARQUAD 12-50 Dodecil-trimetil ammónium-klorid Dimetil-dodecil-amin Dimetil-benzil-amin Triizooktil-amin SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás glükóz izomeráz tisztítására vizes oldatból való elkülönítésével, 0°C és 15 az enzim inaktiválódási hőmérséklete közötti hőmérsékleten, 6,5—7,5 pH tartományban, azzal jellemezve, hogy a vizes oldatot (I) általános képletű amin-származékkal — ahol 5 R, jelentése 8—14 szénatomos alkil-, benzil-, (1—4 szénatomos alkil)-benzil-, dihalogén-benzil- vagy naftil-metil-csoport, R2 jelentése 10—18 szénatomos alkil- vagy (diizobuti 1-fenoxi ) -etoxi-eti 1-csoport, 10 R3 jelentése 1—4 szénatomos alkilcsoport, R4 jelentése hidrogénatom vagy 1—4 szénatomos alkilcsoport, és X- jelentése egy anion, előnyösen halogenid anion — 15 kezeljük az oldatra számítva 500—5000 ppm koncentrációban a keletkezett enzimtartalmű csapadékot ismert módon elkülönítjük, és kívánt esetben a kapott csapadékot szervetlen ionos sót tartalmazó vizes közegben újra fel- 20 oldjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vizes oldatot az (I) általános képletű vegyületek körébe tartozó (II) 25 általános képletű amin származékkal kezeljük, ahol n jelentése egész szám, melynek értéke 12, 14 vagy 16 lehet, X jelentése pedig egy anion, előnyösen halogenid anion, majd a keletkezett enzimtartalmú csapadékot el- 30 távolítjuk az oldatból. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vizes oldatot olyan (II) általános képletű amin-származék keverékkel kezeljük, ahol C«H2n+i jelentésében n értéke 35 12, 14 és 16. 4. A 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vizes oldat pH-ját 7,0—7,4 értékek közé állítjuk be. 40 5. A 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vizes oldatban az amin-származék végső koncentrációja legalább 1000 ppm mennyiségű. 6. A 2—6. igénypontok bármelyike szerin- 45 ti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vizes oldatot C,2—te alkil-dimetil-benzil ammónium-kloriddal kezeljük. 7. Az 1—6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vizes olda-50 tot oktil-dodecil-dimetil-ammónium-kloríddal, sztearil-dimetil-ammónium-kloriddal vagy dodecil-dimetil-ammónium-kloriddal kezeljük. 16 1 lap rajz képletekkel 9
