199511. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sárgaszínű, stabil humán albumin oldat előállítására emberi vérplazmából
HU 199511 A nátrium-kapriláttal történő kicsapására vonatkozó utalás a szakirodalomban nem lelhető fel. A nátrium-kaprilátot ugyan felhasználják albumint stabilizáló hatásánál fogva különböző albumin oldat előállítását célzó eljárásokban amennyiben a műveleti lépéseket relatív magas hőmérsékleten vitelezik ki. így például az előzőekben már idézett Curling féle kromatográfiás plazmafrakcionáló eljárás során a palackozott albumin oldat (végtermék) 10 órán át tartó 60°C-on végzett pasztörizálásánál, vagy a 210 088 számú csehszlovák szabadalmi leírásban fellelhető eljárásban (Chem. Abstr. 98: 598778 u.), mely hemolitikus (hemoglobinnal szennyezett) plazma, vagy szérum hemoglobinmentesítéssére szolgál 45°C hőmérsékleten kloroformmal nátrium-kaprilát jelenlétében. A nátriumkaprilát albumint magas hőmérsékleten stabilizáló hatása nem ad azonban kitanítást a plazma nátrium-kapriláttal történő o^-globulin mentesítésére vonatkozóan. Az eljárás szerinti hemoglobinmentesítés kloroformmal, szobahőmérsékletnél magasabb (35—55°C) hőmérsékleten történik nagy ionerősség mellett. Az így előállítható albumin ezenkívül, mivel a kloroform molekulák irreverzibilisen kötődnek az albumin molekulához, karcinogén hatásúak ezért az eljárással készült termék gyógyászati forgalomba sem került. A fenti találmány szerint előállított sárga színű albumin mely csak 97% tisztaságú, a további kromatográfiás tisztítás során eljárásunkkal ellentétben, zöld színűvé válik a bilirubin oxidálása következtében keletkező zöld biliverdin miatt. Az általunk kidolgozott eljáráshoz nem szükséges sem kloroform, sem magasabb hőmérséklet, mivel sótalanítás után, kis ionerősségen megy végbe a reakció. A fehérjéket nem hődenaturációval és kloroform jelenlétében csapjuk ki, ezért a további kromatográfiás tisztítás során más fehérjék is előállíthatok. A már törzskönyvezett eljárásunkkal előállított albumint több mint két éve minden mellékhatás nélkül terápiás célra használják. Készítményünk immunoelektroforézissel vizsgálva 100% -os tisztaságú. A találmány tárgya eljárás sárga színű stabil humán albumin oldat előállítása emberi vérplazmából, melynek során a vérplazmából a véralvadási faktorokat ismert módon kinyerjük, majd az alvadási faktoroktól mentes vérplazmából ismert eljárással a sókat eltávolítjuk a sdtalanított plazma a) pH értékét savval, előnyösen 1 mólos ecetsavval 3,9—4,5 értékre, előnyösen pH 4,2 értékre állítjuk, majd 1 mólos nátriumkaprilát oldattal a pH értéket 5,0—;5,4-re, előnyösen 5,2 pH értékre állítjuk ezt követően az oldat elektromos vezetését desztillált víz adagolásával 1,4—1,8 előnyösen 1,6 milli Siemens értékre állítjuk be a reakcióelegyet, egy éjjelen át szobahőmérsékleten állni hagyjuk majd 14.000 perc fordulatszámmal centrifugáljuk, vagy b) pH értékét savval előnyösen 2 mólos 3 ecetsavval 3,9—4,5 pH értékre, előnyösen 4,4 pH értékre állítjuk majd 4,3 pH érték eléréséig kaprilsavat adagolunk a reakcióelegyet egy órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd 14.000/perc fordulatszámon centrifugálunk, a csapadékot elvetjük a felülúszó pH értékét lúggal, előnyösen 1 mólos nátrium-hidroxid oldattal 5,0—5,4 pH értékre, előnyösen 5,2 pH értékre állítva az oldat vezetőképességét desztillált víz adagolásával 1,4—1,8, előnyösen 1,6 milli Siemens értékre állítjuk be, a reakcióelegyet egy éjjelen át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 14.000/perc fordulatszámmal centrifugáljuk, a tiszta felülúszót a továbbiakban az ismert kromatográfiás plazmafrakcionáló módszerrel anion-, majd kationcserélő gyantán tisztítjuk, gélszűrőn tovább frakcionáljuk, ultraszűréssel a kívánt 20,0% albumin koncentráció értékre állítjuk be, az így nyert 20%-os oldat pH-ját és nátrium-klorid koncentrációját a fiziológiás-értékre állítjuk, majd nátrium-kaprilát stabilizátor jelenlétében sterilre szűrjük, ezt követően a palackozott albumin oldatot 10 órán át 60°C hőmérsékleten pasztörizáljuk. A találmány szerinti eljárás főbb előnyei a következők: a) az eljárással előállított termék minősége a gyógyszerkönyvi előírásoknak megfelel: az albumin oldat sárga színű, az oldatból állás után csapadék nem válik ki: b) az eljárásunkkal előállított termék gyógyszerkönyvi követelményeknek megfelelő minősége lehetővé teszi gyógyászati felhasználásra alkalmas albumin oldat előállítását a hideg alkoholos kicsapásos eljárásnál biztonságosabb és lényegesen gazdaságosabb kromatográfiás plazmafrakcionáló módszerrel nagyüzemi léptékben. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákban ismertetjük: 1. példa Albumin oldat előállítása emberi vérplazmából Curling módszerével [Vox Sang. 33, 97—107 (1977)], műveleti lépések és a végtermékként nyert albumin oldat jellemzése. Alvadási faktoroktól ismert módon mentesített emberi vérplazmát előzetesen 0,005 mólos 7,0 pH-ju 0,39 milli Siemens vezetőképességű nátrium-acetáttal ekvilibrált Sephadex G-25 jelű (Pharmacia katalógusszám (1988): 17—0034—01) gyantaoszlopra viszünk fel, a sótalanított eluátum pH-ját 1 mólos sósav oldattal 5,2 pH értékre állítjuk, a reakcióelegyet egy éjjelen át 4°C hőmérsékleten állni hagyjuk, majd centrifugáljuk, a centrifugálás után kapott felülúszót előzetesen 0,2 mólos 5,2 pH-jú 1,5 milli Siemens (továbbiakban mS) vezetőképességű nátriumacetát pufferral ekvilibrált DEAE Sepharose FF jelű (Pharmacia katalógusszám (1988): 17— 0709—01) anioncserélő-gyanta oszlopra viszszük fel, az elúciót három lépcsőben a következő pufferekkel végezzük: 1) 0,02 mólos 4 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
