199480. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált tiacikloalkeno [3,2-b]piridin-származékok, és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
HU 199480 B A nitrendipin-kötődés gátlását az alábbiak szerint vizsgáljuk: 1—2 kg-os, nőstény, űj-zélandi fehér nyulakat használunk a vizsgálathoz. A nyak kitekerésével elölt állatok szívét azonnal eltávolítjuk, megtisztítjuk és kis darabokra vág-I'uk. A szövetet ötszörös térfogatú 0,05 mól/l :oncentrációjú Hepes-pufferben (pH 7,4) homogenizáljuk. A homogenizátumot 4000 g-vel 10 percen keresztül centrifugáljuk; a felüiúszót 42000 g-vel 90 percen keresztül újra centrifugáljuk. A kapott membrán-pasztillát grammonként 0,7 ml 0,05 mól/l koncentrációjú Hepes-pufferben (pH 7,4) újraszuszpendáljuk és —70°G-on raktározzuk a felhasználásig. A kötődési vizsgálatban minden egyes cső 0,05—0,50 nmól/1 3H-nitrendipint, puffert, 0,10 ml membránt és vizsgálandó vegyületet tartalmaz, 1,0 ml végtérfogatban. Az elegyet 4°C-on 90 percen keresztül inkubáljuk, majd a kötött nitrendipint a kötetlen nitrendipintől Whatman GF/C szűrőn átszűrve elválasztjuk. Öblítés után a szűrőket szárítjuk és a radioaktivitást folyadékszcintillációs számlálóval mérjük. A nem-specifikusan kötött 3H-nitrendipint (vagyis azt a nitrendipin-mennyiséget, amely feleslegben lévő, jelzetlen nitrendipin jelenlétében kötődik meg) az összes megkötődött mennyiségből levonva kapjuk a specifikusan kötött, radioaktívan jelzett nitrendipin mennyiséget. A vizsgált vegyület jelenlétében mért, specifikusan kötött nitrendipin mennyiségét a 17 vegyület távollétében mért megkötött mennyiséghez viszonyítjuk, így kapjuk a %-os kiszorítási (vagy gátlási) értéket. A kalcium-függő simaizom-kontrakció gát- 5 lását az alábbi vizsgálattal határozzuk meg: Kálium-klorid feleslegének injektálásával elölt kutyákból származó nyelőcsövet 4°C-on oxigénezett Krebs-Henseleit-pufferbep tartunk egy éjszakán át. A hörgő felé eső végről 10 kiindulva egy porc-szegmens szélességű nyelőcső-gyűrűket (5—10 mm) vágunk. A porc elvágása után a nyelőcső-izomszövetet 25 ml-es szövet-fürdőben 37°C-on oxigénezett Krebs-Henseleit-pufferben szuszpendáljuk. Az 15 egyensúlyi állapotot 60 perc alatt hagyjuk kialakulni, majd a szövetet 10 pmól/1 koncentrációjú carbachol-lal provokáljuk. 5 perc múlva a szöveteket ödlítjük és 50 percen át nyugalomban hagyjuk. A szöveteket ezután 20 50 mmól/1 koncentrációjú kálium-klorid hatásának tesszük ki, és 30 perc elteltével megmérjük a koncentrációt. A szöveteket ezután kiöblítjük, és 50 percen keresztül újra ekvilibráljuk. Ezután hozzáadjuk a vizsgálandó ve- 25 gyületet, és a szöveteket 10 perc múlva újra 50 mmól/1 koncentrációjú kálium-kloriddal provokáljuk. 30 perc elteltével meghatározzuk a kontrakciót, és a mért értékekből kiszámítjuk a %-os gátlást. 30 A simaizom-kontrakció %-os gátlását a vizsgált vegyület hozzáadása előtt és után mértösszehúzódási értékekből számítjuk ki, az alábbi egyenlet segítségével: 18 %-os gátlás 100-100 maximális összehúzódás kezelés előtt maximális összehúzódás kezelés után A kapott %-os gátlási értékek alapján értékeljük a vizsgált vegyületeket. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletű tiacikloalkeno(3,2-b] piridin-származékok — a képletben n értéke 2 és 6 közötti egész szám, R, jelentése 1—4 szénatomos alkilcsoport, R2 jelentése 1—4 szénatomos, egyenes vagy elágazó szénláncú alkilcsoport, benzilcsoport, 6-tagú tiacikloalkilcsoport, N-benzil-piperidinil-csoport, vagy -(2—4 szénatomos alkilén)-X általános képletű csoport, ahol X jelentése hidroxilcsoport, piridilcsoport vagy -NR4R5 általános képletű csoport, az utóbbi képletben R4 és R5 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1—4 szénatomos alkilcsoport, fenilcsoport, benzilcsoport, fenil-etil-csoport, vagy R4 és R5 a kapcsolódó nitrogénatommal együtt öt- vagy hattagú, benzolgyűrűvel kondenzált, telített heterociklusos gyűrűt alkot, és R3 jelentése 1—4 szénatomos alkil-tio-csoporttal szubsztituált 3-piridil-csoport; cianocsoporttal, difluor-metoxi-csoporttal, nitrocsoporttal, trifluor-metil-csoporttal vagy halogénatommal mono- vagy egymástól függetlenül diszubsztituált vagy 5 halogénatommal szubsztituált fenilcsoport — és gyógyászatiig elfogadható savaddíciós sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy egy (V) általános képletű vegyületet egy (VI) általános képletű vegyülettel és egy (VII) általános képletű vegyülettel reagáltatunk, a képletekben n, R,, R2 és Rj jelentése a fenti, majd a) abban az esetben, ha n értéke 2, egy kapott (VIII) általános képletű vegyületet — a képletben 11 45 50 55 60 65
