199462. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirimido/4,5-g/kinolin-származékok és az azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 199462 B 43 44 rációját a reakcióelegyben, a 3. oszlop a cik- kában,, a 4. oszlop a megbízhatósági szinlusos AMP keletkezését a kontrol százaié- fet vagy szignifikanciát tartalmazza. 10, táblázat A ciklusos AMP koncentrációja a striatum Vegyűlet membránban Koncentráció (mikromólban) Ciklusos AMP képződés a kontrol százalékában p Dopamin 100 160.0 + 14.8 <0.01 Racemat 1 130.8 + 0.8 < 0.05 5aR ,9aR enantiomer 1 119.2 + 1.3 <0.001 5aS ,9aS en mtiomer 1 165.0 + 3.1 <0.01 lö mikromólos GTP jelenlétében az alap adenil-cikláz aktivitás a patkány striatum membránban 196,2±20,3 pmól/min/mg protein átlagértékű. A vegyületeket három párhuzamos meghatározással vizsgáltuk. A 10. táblázatban bemutatott adatok szerint a (11a) általános képletű,. 5aS,9aS enantiomer szignifikánsan növeli a ciklusos AMP képződését, szignifikáns D-l dopamin agonista aktivitást jelezve. Hatékonyabb mint a racemát, míg a (II) általános képletű 5aR,9aR enantiomer által indukált ciklusos AMP-növekedés alig felel meg a kívánt' szignifikáncia értéknek. A D-l agonísta aktivitásnak egy másik, különösen érzékeny indikátora a szövet szeletben fellépő ciklusos AMP-kibocsátás meghatározása; ezt a meghatározást Stoof és Kebabian eljárása alapján végezzük [Nature 294,266 (1981) és Brain Res, 250, 263 (1982)]. Ebben az eljárásban a patkányagyból striatum szövetet metszünk ki, és 0,3 mmX0,3 mm méretű darabokra vágjuk fel. A szövetdarabokat megfelelő puffer-rendszerben (pl. Earl-féle kiegyenlített sóoldatban) szuszpendáljuk, és a szuszpenzión folyamatosan 95:5 arányú 02/C02 gázelegyet bocsátunk át, miközben a hőmérsékletet 37°C-on tartjuk. Közvetlenül felhasználás előtt a szövetdarabokat olyan friss közegbe visszük át, amelyhez 2,5 mg/ml marha szérum albumint és 3-izobutil-l-metil-xantint (1 millimoláris mennyiségben) adunk & ciklusos AMP bomlásának megakadályozására. A szövetdarabokat gyógyszert nem tartalmazó pufferban inkubáljuk, és azután átvisszük egy ugyanolyan közegbe, amelyhez gyógyszert adtunk. A gyógyszert tartalmazó és a gyógyszer nélküli inkubációs közeg alikvot részeiben meghatározzuk a ciklusos AMP-koncentrációt egy specifikus radioimmunoassay eljárással. A gyógyszernek vagy a gyógyszereknek a kibocsátásra gyakorolt hatását a nyugvó állapotban mért ki bocsátás százalékaként adjuk meg. 25 30 A következő közeget használjuk: Alkotórész NaCI KCl NaHCOj NaH2P04 MgS04.7H20 d-glükóz CaCl2.2H20 fenol vörös Koncentráció (mg/liter) 6800,0 402,6 2201,1 137,99 147,88 1009,0 191,1 10,0 35 Az előbb említett hivatkozásban leírt kísérletekben Stoof és Kebabian szulpiridet használt, hogy elnyomja bármely olyan gyógyszer negatív (anti D-l) hatását, amely dopamin D-2 agonistaként hat. A szerzők koráb- 40 ban kimutatták, hogy égy D-2 agonista elnyomja a ciklusos AMP-képződést (a D-l agonista által előidézett hatással ellentétes effektus). A szulpirid a hipofízis D-2 receptorok ismert antagonistája. Ha egy tesztrend- 45 szerhez, mint amilyet a fentiekben leírtunk, szulpiridet adunk, az blokkolja egy gyógyszer minden D-2 hatását a ciklusos AMP termelés csökkentésében. Stoof és Kebabian ki tudta mutatni, hogy a szulpiridnek nincs hatása 50 a ciklusos AMP-termelésre a striatum szövetben, oly módon, hogy SKF 38393 jelű vegyületet ( 1,2,3,4-tetrahidro-7,8-dihidroxi-l-fenil-lH-3-benzazepint) használtak tiszta D-l agonistaként, ezáltal jelezve, hogy D-2 recep- 55 torok nem vesznek részt a folyamatban, és a vegyületnek nincs D-2 agonista aktivitása. Egy ilyen . meghatározásnak az eredményeit az 5aS,9aS-2-amino-6-n-propil-5,5a,6,7,- 8,9,9a, 10-oktahidro-pirimido [4,5-g] kinolin-digQ hidroklorid (A jelű vegyűlet) esetére a 11. táblázat tartalmazza. A táblázat első oszlopa az esetenként adagolt gyógyszert, a második oszlopa a gyógyszer koncentrációt; a harmadik oszlopa a jelenlévő ciklusos AMP-szintet; és a negyedik oszlopa a ciklusos AMP koncentráció százalékos növekedését mutatja. 23
