199451. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-[(piperidin-4-il)-metil]-1,2,3,4-tetrahidroizokinolin-származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
23 HU 199451 B 24 Megjegyzések: HCl: hidroklorid diHCl: dihidroklorid 1/ egy ekvivalens izopropanolt tartalmazó fumarát 2/ fumarát hemihidrát 3/ fumarát monohidrát "/ a C10H7 4 és a C30P0r,t oí- ill. jâ-naftilcaoportot jelent. A találmány szerinti vegyületeken elvégzett farmakológiai próbák a vegyületek terápiás hatékonyságát igazolják. Ezek olyan vizsgálat tárgyát képezték,, amely a patkány hippocampusában jelenlévő, 5-HT.a típusú szerotoninerg receptorok iránti affinitásuk kimutatására alkalmas. A vegyületek megszüntetik egy izotóppal jelzett specifikus ligandnak, a [3H] -8-hidroxi-2-n-dipropil-amino-tetralinnak (a továbbiakban 3H-8-OH-OPAT, amelyet Gozlan és munkatársai írtak le: Nature 305, 140—142 (1983)) az 5-HT,a receptorokhoz való kötődését. 160—200 g tömegű hím Sprague-Dawley patkányokat használtunk a kísérletekhez. Fejlevágás után kiemeljük az agyat és kivágjuk belőle a hippocampust. A szövetet Ultra-Turrax Polytron készülékben 30 sec-ig, a maximális sebesség felével homogenizáljuk sósavoldattal pH 7,4-re beállított 10 térfogat 50 mM Trisz-pufferben (100 mg friss szövet per ml). A homogenizált szövetet 4°C-on háromszor mossuk, közben minden alkalommal 48000 g-vel 10 percig centrifugáljuk és az üledéket friss hideg pufferben szuszpendáljuk. Végül az utolsó üledéket annyi pufferben szuszpendáljuk, hogy 100 mg kiindulási szövet legyen 1 ml 50 mM pufferben. Ezután 37°C-on 10 percig inkubáljuk a szuszpenziót. A 3H-8-OH-DPAT-vel (1 nM) való kötődés meghatározása céljából 100 pl membránszusz* penziót 10 pM pargillint és 3 pM paroxetint tartalmazó 1 ml végtérfogatú pufferben inkubálunk 15 percig 37°C-on. Az inkubálás után a membránokat Whatman GF/B szűrőkön gyűjtjük össze. A szűrőket 5 ml jéghideg pufferrel háromszor átmossuk. A szűrőket szcintillációs folyadékba helyezve radioaktivitásukat folyadékszcintillációs készülékben határozzuk meg. A 3H-8-OH-DPAT specifikus kötődését a szűrőkön visszamaradt radioaktivitásként definiáljuk» amely gátolható 10 pM 5-hidroxi-triptaminnal való együttes inkubálás útján. 1 nM 3H-8-OH-DPAT koncentrációnál a fajlagos kötődés a szűrőn kimutatott összes radioaktivitás 90%-át teszi ki. A vizsgált vegyületek minden koncentrációjánál meghatározzuk a 3H-8-OH-DPAT-vel való kötődés gátlásának százalékát, majd a kötődést 50%-kal gátló koncentrációt, azaz az 1C50 értéket. A találmány szerinti vegyületek IC50 ér- 20 téke 0,001 és 0,3 pM közé esik. A találmány szerinti vegyületek centrális hatását macskán, a reszerpinnel indukált „PGO-csúcsokra“ (ponto-geniculo-okcipitális csúcsok) kifejtett hatása .alapján PGO-R 25 teszt) értékeljük Deporteere H. módszerével Steep 1976, 358—361. oldal (Karger, Bázel 1977). A vizsgálandó vegyületek kumulatív dózisait mesterségesen lélegeztetett kurarizált 30 macskáknak (0,001—3 mg per kg. ív.) 30 perces időközönként adjuk be, 4 óra múlva 0,75 mg per kg reszerpin ip. injekciója után. Meghatározzuk az elektroenkefalográfiás és fázisos aktivitásokat (PGO-R csúcsok) agy- 35 kérgi és mély elektródok segítségével (oldalsó geniculum). A viszgált vegyület minden dózisára meghatározzuk a PGO-csúcsok számának százalékos csökkenését, majd az AD50 értéket, azaz e csúcsok számát 50%-kal 40 csökkentő hatásos dózist. A találmány szerinti vegyületek EDS0 értéke 0,001 és 3 mg per kg közé esik iv. adás esetén. A próba eredményei azt mutatják, hogy az (I) általános képletű vegyületek in vitro erős és szelektív affinitást mutatnak az 2HT,a típusú szerotoninerg receptorok iránt. In vivo agonista, részlegesen agonista vagy antagonista aktivitást mutatnak e receptorok szintjén. 50 tey a találmány szerinti vegyületek az 5-HTa , típusú szerotoninerg receptorokat közvetve vagy közvetlenül befolyásoló betegségek kezelésére, nevezetesen depressziós állapotok, szorongásos állapotok, alvászavarok gg kezelésére, a táplálékfelvétel szabályozására, valamint ér- vagy szív-érrendszeri betegségek, mint migrén és magas vérnyomás kezelésére használhatók. Ilyen célból megfelelő segédanyagokkal együtt orális vagy parenterális adagolásra 60 alkalmas bármely formában előállíthatok és napi 1 —1000 mg dózisban alkalmazhatók. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletű vegyü- 65 letek és savaddíciós sóik — e képletben
