199424. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kinolin-tioéterek és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
HU 199424 B Ip A klórdiazepoxid jellegzetes anxiolitikűs Ifghatását o,l mg/kg s.c. dózisban fejti ki, míg a flszedatív dózis 10 mg/kg. ife Minthogy a klórdiazepoxid hatását a benffzodiazepin receptorokon ható agonistaként fejti ki, e hatóanyag anxiolitikűs hatását az í^RO-15-1788 jelű szelektív- benzodiazepin re-ceptor antagonista antagonizáljá. Ezt a 2. táblázatban mutatjuk be. A 3. táblázat az A-vegyület szorongás-ellenes hatását ismerteti. Az A-vegyület szorongás-ellenes szerként ebben a tesztben kb. 20-szor erősebb hatású a klórdiazepoxidnál. " Az A-vegyület szorongás-ellenes aktivitásának RO-15—1788 által történő antagonizálását a 4. táblázatban mutatjuk be. Azt találtuk, hogy a klórdiazepoxid esetében a szedatív és anxiolitikűs dózis hányadosa 10:0,1 = 100 (lásd: 1. táblázat), míg az A-vegyület esetében az az arány 2,5:0,005= =500 (lásd: 3. táblázat). 3. A-vegyület benzodiazepin receptorokhoz való kötődésének mérése Az A-vegyület in vitro kapcsolódását klórdiazepoxiddal összehasonlítva patkányagymembrán-preparátumon határozzuk meg. Hím CFY kortexet 0,32 mólos szacharózban homogenizálunk, teflon-mozsártörővel ellátott üveghomogenizátor felhasználásával. A magot 15 percen át 1000 g mellett tömörítjük. A felül elhelyezkedő folyadékot 40000 g mellett 15 percen át centrifugáljuk. A pelletet 5 mmólos trisz-citrát pufferben (pH=7,l) Polytron P 10 segítségével homogenizáljuk és 15 percen át 0°C-on lizáljuk. Ezután 40000 g mellett 15 percen át centrifugáljuk, majd a pelletet 50 mmólos trisz-citrát pufferben (pH=7,l ) felvesszük és egy éjjelen át —20°C- on tartjuk. Felolvasztás és centrifugálás (40000 g mellett 15 percen át) után a pelletet 50 mmól trisz-citrát-pufferral (pH=7,l) centrifugálással háromszor mossuk. A végső pelletet 1:30 térfogat-arányban a fenti puffer- . ben felvesszük: Ligand: 2 nM3H-Diazepam (fajlagos aktivitás 86 Ci/mmól) Inkubálás: 1 órán át 0—4°C-on 50 mmól trisz-citrát-pufferben (pH=7,l). Végső térfogat: 0,25 ml Végső fehérjekoncentráció: kb. 0,5. mg/ml ; A kötést hideg pufferral történő hígítással megszakítjuk és GF/B Whatman szűrőpapíron gyorsan szűrjük. A kiszorításhoz a teszt-vegyületet hat különböző koncentrációban alkalmazzuk, három párhuzamost futtatva. A kísérleteket kétszer megismételjük. Az A-vegyületet tömény ecetsavban és desztillált vízben oldjuk, majd a 10-3 mólos oldatot inkubációs pufferrel továbbítjuk. Vakpróbaoldatot a hatóanyag elhagyásával a fenti módon készítünk. m 5 A klórdiazepoxid (1. ábra) és az A-vegyület (2. ábra) koncentrációtól függő módon kiszorítja a 3H-diazepamot receptoráról. Az IC50 érték mindkét hatóanyag esetében azonos koncentrációtartományba esik. Minthogy a vakpróba 10-4 mólnál kisebb koncentrációban nem szorítja ki az izotóppal jelzett diazepámot, az ecetsavnak az A-vegyületre gyakorolt hatása kizárható. 4. Az A-vegyület elektrogén és gyógyszer által kiváltott görcsök ellen kifejtett hatása Az A-vegyület 200 mg/kg terjedő orális dózisban nem védi ki a pentametazol, sztrichnin és piktrotoxin által kiváltott görcsöt és patkányon elektrosokk által előidézett görcscsel szemben csupán gyenge védőhatást mutat. Pentametazol 120 mg/kg s.c. befecskendezés patkányok elülső és hátsó végtagjain görcsös rángatózásokat idéz elő és az állatok 100% -a elpusztul. A 120 mg/kg pentametazol befecskendezés előtt beadott 10 mg/kg diazepam vagy fenobarbital-nátrium hatására a gőrcsöTc enyhülnek, az állatok életben maradnak és egyetlen előkezelt patkány sem pusztul el. Ezzel szemben a patkányok 200 mg/kg A-vegyülettel történő előkezelése sem enyhíti a pentametazol-által kiváltott görcsök erősségét és a kísérletet egyetlen állat sem éli túl. Az A-vegyület (200 mg/kg) a diazepam antikonvulziv hatását nem befolyásolja (10 mg/kg). A sztrichnin által előidézett (2,5 mg/kg s.c.) halálos görcsöket 50 mg/kg fenobarbital-nátrium (pusztulási arány 40%) és 10 mg/kg diazepam (pusztulási arány 80%) részlegesen antagonizálja, ezzel szemben az A-vegyület még 200 mg/kg dózisban sem fejt ki egyáltalán hatást. A pikrotoxin által előidézett (10 mg/kg s.c.) halálos görcsöket 50 mg/kg fenobarbital-nátrium (pusztulási arány 80%) enyhén befolyásolja; ezzel szemben diazepammal vagy A-vegyülettel előkezelt patkányokon a görcsök hatása változatlan marad. Elektrosokk által előidézett halálos görcsöket. 200 mg/kg, A-vegyület enyhén befolyásol (az állatok 70%-a elpusztul; fenobarbital-nátriummal történő előkezelés (30— 50 mg/kg) teljesen megvédi a patkányokat az elektrogén görcsöktől, míg a diazepam a patkányok 80%-ának életét megmenti. összefoglalva megállapítható, hogy állatkísérletekben az A-vegyület potens és szelektív anxiolitikűs hatóanyagnak bizonyul. Szorongás-ellenes hatása feltehetően a benzodiazepin-receptorokhoz kapcsolódik, azonban — a benzodiazepinekkel éles ellentétben — klinikai felhasználás során az A-vegyület szedatív és anfikonvulzív hatástól gyakorlatilag mentes. 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
