199129. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új amino-metil-fenol-pirazinok és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
7 199129 8 tát az elektrolitkoncentrációk alapértékeinek meghatározása céljából. A vérmintákban meghatároztuk a plazma káliumkoncentrációját, és vizsgáltuk, hogy ez az érték időben menynyire állandó. A plazma káliumkoncentrációját akkor tekintettük időben állandónak, ha a változás mértéke 0,25 mekv-nál kisebb volt. A vizsgálatok céljaira azokat a kutyákat tartottuk fenn, amelyek vérplazmájának káliumszintje az alapérték meghatározásának időszakában 4,00—4,30 mekv volt. A vérmintákat az állatok első lábából a vena saphena-n vagy a juguláris vénán keresztül vettük le. A vérvételhez 20-as méretű tűt és 5 ml űrtartalmú fecskendőt használtunk, és minden alkalommal 5 ml vért vettünk az állatoktól. A vérmintákat konzerválás céljából 100 pl 1000 NE heparint tartalmazó heparin oldattal kevertük össze. A vérmintákat 10 percig 2500 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk, majd a plazmát pipettával kémcsövekbe mértük be (a kémcsöveket megfelelően megjelöltük), és a mintákat az elektrolit-tartalom meghatározásáig lefagyasztottuk. A kontroll vérminták elemzése után a kutyákat véletlenszerűen csoportokba osztottuk; egy-egy csoport legalább 4 állatból állt. A hatóanyagokat 2/00 vagy 3/00 méretű zselatin kapszulába töltve vagy szondán keresztül orális úton adtuk be az állatoknak. A hatóanyagokat ultrahang-kezeléssel 10 ml fiziológiás sóoldatban szuszpendáltuk. Az állatok testtömegét mértük (az állatok testtömegét a kontrollvizsgálatok 3 napja alatt mért értékek átlagából számítottuk ki, és a hatóanyagot az állatok testtömegéhez viszonyított mennyiségben (mg/kg) adtuk be. Minden egyes vizsgálatban a vizsgálati időszak azonos napjain, a délelőtti órákban (10 és 11 óra között) adtuk be a hatóanyagot az állatoknak. Ha a hatóanyagot kapszulában adtuk be, az állatok szájába fecskendőn keresztül 5—10 ml vizet is juttatunk. Az állatok véréből a vizsgálati időszak 4., 11., 7., 14., 21. és 28. napján vettünk mintát. A vérmintákat Micro-hematocrit kapilláris csövekbe gyűjtöttük, és a plazmaminták összegyűjtése után azonnal leolvastuk a hematokrit értékeket. Ezután meghatároztuk a plazmaminták káliumkoncentrációját. Az alapértékekhez viszonyítva lényeges eltérést egyetlen esetben sem észleltünk. A felsorolt vizsgálatok alapján a (III) általános képletű vegyületek eukalémiás diuretikumoknak bizonyultak. A vizsgálatokban a terápiás dózis sokszorosának beadása után sem észleltünk toxicitásra utaló tüneteket. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. Amennyiben a példákban mást nem közlünk, (i) a műveleteket szobahőmérsékleten (18—25°C) végeztük; (ii) az oldószerek lepárlásához forgó bepárlókészüléket használtunk, a lepárlást legföljebb 60°C fürdőhőmérséklet fenntartásával csökkentett nyomáson (600—4000 Pa, 4,5— 30 Hgmm) végeztük; (itt) a gyorskromatografáláshoz Merck Kieselgel Art. 9385 minőségű szilikagélt, az oszlopkromatográfiás műveletekhez Merck Kieseigel 60 Art. 7734 minőségű szilikagélt használtunk (gyártja az E. Merck cég, Darmstadt, Német Szövetségi Köztársaság), a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatokhoz 0,25 mm vastagságú GHLF Art. 21521 minőségű, Analtech gyártmányú szilikagél lemezeket használtunk (gyártja az Analtech cég, Newark, Delaware, Amerikai Egyesült Ál Tárnok) ; (iv) a reakciók lezajlását rendszerint vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatokkal követtük, ezért a közölt reakcióidők csak tájékoztató jellegűek; (v) a közölt olvadáspont-adatok korrigálatlan értékek, esetenként a kémiailag azonos anyagok olvadáspontja polimorfia miatt eltérő; , • (vi) valamennyi végtermék vekonyretegkromatográfiás vizsgálat és mikroelemzési adatok alapján lényegében tiszta volt; (vii) a közölt hozam-adatok csak tájékoztató jellegűek, mert nem törekedtünk maximális hozam elérésére; (viii) a csökkentett nyomásértékeket Pa egységekben, az egyéb nyomásértékeket bar egységekben adtuk meg; (ix) a közölt oldószer-arányok térfogatarányok; (x) a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatokhoz felhasznált „A" oldószerelegy metanol, trietil-amin és metilén-klorid 25:5:70 térfogatarányú elegye; (xi) a szerves fázisokat nátrium-szulfát fölött szárítottuk. I. példa 3,5-Diamino- N- [2-( /2- [ (/3-bróm-5- ( 1,1 -dimetil-etil)-2-hidroxi-fenil/-metil)-amino] -etil/ -metil-amino)-etil] -6-klór-pirazin-karboxamid előállítása [(III) általános képletű vegyület, A=C1, R7=R8=H, R*=metil-, Z=Br, R6=terc-butil] (a) 1,52 g (3,74 mmól) 3,5-diamino-N- [2-(/2-amino-etil/-metil-amino)-etil] -6-klór-pirazin-karboxamid-trihidroklorid („A" vegyület) 100 ml 95%-os vizes etanollal készített oldatát 1,7 g (20,0 mmól) nátrium-hidrogén-karbonáttal semlegesítjük. A kapott szuszpenzióhoz 1,15 g (4,5 mmól) 2-hidroxi-3-bróm-5-( 1,1 -dimetil-etil) -benzaldehidet [a Science 105, 409 (1947) közleményben leírtak szerint előállított vegyület] adunk. Az elegyet 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd 0,23 g (5,0 mmól) nátrium-bórhidridet adunk hozzá. 2 óra elteltével az oldószert lepároljuk, és a maradékot víz és metilén-klorid között megoszlatjuk. A szerves fázist szárítjuk és bepároljuk. A mara-5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
