198964. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glikopeptid-antibiotikumok és ezeket tartaalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
15 HU 198964 B 16 például ultraibolya, Röntgen gamma besugárzással vagy N-metil-N’-nitro-N-nitrozo-guanidines kémiai indukcióval. A Nocardia orientalis tenyésztéséhez használt tópközeg a nagy számú táptalaj bármelyike lehet. A termelés gazdaságossága, az optimális hozadék és a termék könnyű kinyerhetősége szempontjából bizonyos táptalajok előnyösebben használhatók. így például nagyméretű fermentálásnál előnyös szénhidrátforrás a glükóz és a burgonya dextrin, noha a ribóz, xilóz, fruktóz, galaktóz, mannóz, mannit, oldható keményítő és hasonlóak szintén alkalmazhatók. Előnyös nitrogénforrás az enzimmel hidrolizált kazein és hús-pepton, de ugyancsak használhatunk élesztőkivonatot, savval hid— rolizólt kazeint, marhahúskivonatot, hallisztet, májlisztet, stb. is. A táptalaj alkotórészét képező szervetlen sók a szokásos vízoldékony sók, melyek cink-, nátrium-, magnézium-, kalcium-, ammonium-, klorid-, karbonát-, szulfát-, nitrét- és hasonló ionokat szolgáltatnak. A táptalajnak tartalmaznia kell a mikroorganizmus növekedéséhez és fejlődéséhez szükséges esszenciális nyomelemeket is. Ezek a nyomelemek szennyezésként általában olyan mennyiségben fordulnak elő a táptalaj többi alkotórészében, mely elegendő a mikroorganizmus növekedéséhez. Ha habzás lépne fel, kis mennyiségű (például 0,2 ml/liter) habzásgátlót, például polipropilénglikolt adhatunk a nagyméretű fermentációs táptalajhoz. Jelentősebb mennyiségű A82 846 antibiotikum-termeléséhez előnyös a süllyesztett aerob tenyésztést tankfermentorban végezni. Kis mennyiségű antibiotikumhoz rázott lombikos tenyészettel is hozzájuthatunk. Minthogy a tankfermentálásnál az antibiotikum-termelés csak általában egy lag fázis után indul meg, ha az oltáshoz spórákat használunk, előnyösebb vegetatív oldóanyagot használni. A vegetatív oltóanyag elkészítéséhez kis térfogatú táptalajt spórákkal vagy micélium-fragmensekkel oltunk be, hogy friss, aktívan növekvő tenyészethez jussunk. A vegetatív oltóanyagot ezután átvisszük a nagy ferinentorba. A vegetativ oltóanyag táptalaja azonos vagy különböző lehet a nagy fermentor táptalajával. Az A82 846 antibiotikumot a termelő mikroorganizmusok 23-37 °C hőmérsékleten növesztve termelik. Az A82 846 antibiotikum termeléséhez az optimális hőmérséklet 30- -31 °C. Amint az a süllyesztett, aerob tenyészeteknél szokásos, a fermentor aljából steril levegőt hajtunk át a táptalajon, miközben lapátos keveróvel kevertetjük. Az alkalmazott körülmények között a maximális oxigénfelvétel nem lépi túl a 0,2 mM/liter/perc értéket. A levegőztetés mértékét és a kevertetést általában olyan szinten kell tartani, hogy az oldott oxigén a telítettségi érték 50%-ánál vagy a felett legyen. Az A82 846 antibiotikum termelését a fei mentáció folyamán időnként vett mintákkal határozzuk meg olyan mikroorganizmusok segítségével, melyek az antibiotikumra szenzitivek. Egyik alkalmas tesztorganizmus lehet a Bacillus subtilis ATCC 6633. A biológiai értékmérést előnyösen lyukasztott agarlemezen végezzük. A süllyesztett, aerob fermentációs körülmények között végzett termelés után az A82 846 antibiotikumot a fermentléböl a szokásos módon nyerhetjük ki. Az antibiotikus aktivitás a micéliumban és a ferinentlében egyaránt megtalálható, ezért az A82 846 antihiitikum maximális kinyeréséhez először a ki'mhutást pll=10,5 értékre állítjuk be, hogy az antibiotikum kijusson a micéliumból, majd a fermentléböl kiszűrjük a micéliumot. A szűrletből az A82 846 antibiotikumot különféle eljárásokkal nyerhetjük ki. Előnyös módszer, ha a szűrt fermentlé kémhatását pH=7 körüli értékre állítjuk be, és az antibiotikumot kationcserélö gyantán, például Dow:-x XF5-43 278, Dowex 50 vagy Amberlite IR-5 20 gyantán kötjük meg. Az aktív anyagot alkalmas oldószerrel, például híg ammómium-hidroxidos oldattal mossuk le a gyantáról. Aí aktív frakciókat csökkentett nyomáson hepároljuk, makroretikuláris gyantán, például Diaion HF-20 és Amberlite XAD-4 gyantán ads'.orbeáljuk, majd alkalmas oldószerrel, példiul víz/izopropanol, 95:5 eleggyel, mely 1% eoetsavnt tartalmaz, eluálva, megkapjuk az A82 846 antibiotikumot. Az aktív anyagot kevés savat tartalmazó víz/acetonitril vagy viz/metanol eleggyel is eluálhatjuk. Hasonló módszerrel választható szét az A82 846 antibiotikum az A82 846A, A82 846B és az A82 846C alkotórészeire. Előnyös elválasztási módszer erre a fordított fázisú (Cis vagy Cs) kromatografia. Más eljárás szerint a fermentlé szilárd komponenseit, mely a micéliumból és a táptalaj szilárd alkotórészeiből áll, extrahálás és elválasztás nélkül - előnyösen a víztartalom eltávolítása után - használjuk fel, mint A82 846 antibiotikum forrást. így például a fermentáció befejeztével az egész fermentieret beszárithatjuk liofilizációval, dob-szérilással vagy azeotropos desztillációval és szá- i itassak A beszárított fermentlevet közvetlenül belekeverjük a takarmánypremixbe. Az A82 846 antibiotikumoknak kitűnő hatásuk van in vivo és in vitro a Gram-pozitív kórokozó baktériumokkal szemben. Különösen váratlan sajátossága ezeknek az antibiotikumoknak a hosszú felezési idejük a ' érben. így például, ha patkányoknak intravénásán viszünk be antibiotikumot, a vankomicinszérum felezési ideje 45 perc, míg az a82 846A és az A82 846B mindegyikének a felezési ideje 2,2 óra. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
