198964. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glikopeptid-antibiotikumok és ezeket tartaalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
29 HU 198964 n 30 500 mg félig tisztított terméket tovább tisztítunk, megismételve a fordított fázisú kromatográfiai. Ehhez egy 1,5x121,92 cin méretű acéloszlopban készített 450 ml-es LP-1/Cis szilikagél oszlopiot használunk. Gradiens elúció 1%-os ammónium-dihidrogén-foszfáttal indulva, a végső eluens 1%-os ammónium-dihidrogén-foszfát oldat/acetonitril, 92:8, áramlási sebesség 11 ml/pere. 25 ml-es frakciókat gyűjtünk, az elúciót 254 nm-en detektáljuk. Az A82 846C antibiotikumot tartalmazó frakciókat (169-210.1 egyesítjük, HP-20 gyantát tartalmazó 5x45 cm méretű üvegoszlopon sótalanitjuk. Az oszlopot 0,1% ecetsavat tartalmazó, metanol/víz, 4:1 eleggyel eluáljuk, 100 ml-es frakciókat gyűjtünk, az elúciót analitikai HPLC-vel kísérjük nyomon, 225 nmen detektálva. Az A82 846C antibiotikumot tartalmazó frakciókat (5-11.1 egyesitjük, csökkentett nyomáson bepároljuk, fagyasztva szárítjuk. 127,3 mg A82 846C antibiotikumot kapunk. Az A82 846A és az A82 846B antibiotikumot tartalmazó egyesített frakciókat az A82 846C antibiotikumot tartalmazó frakció előzőekben ismertetett feldolgozása szerint tisztítjuk tovább, a megfelelő tisztított antibiotikumokhoz jutva. Az A82 846C antibiotikum további tisztításához 70 mg fenti terméket az alábbi kromatogi-áfiás rendszerben dolgozunk fel: Oszlop: Zorbax SCX (9,2x250 mm) kationcserélő. Mozgó fázis: lineáris gradiens; kezdő eluens: 10% metanolt tartalmazó 0,15 M nátrium-dihidrogén-foszfát puffer; végső eluens, 10% metanolt tartalmazó 0,9 M nátrium-dihidrogén-foszfát puffer, a gradiens kialakítás fi perc időtartamú, majd 5 percen át a végső eluenssel eluálunk. A pufferek kémhatását nem állítjuk be adott értékre. Áramlási sebesség: 6,0 ml/perc. Detektálás: 280 nm-en. Bevitt anyagmennyiség: 6,0 mg, vízben oldva. Az A82 846C antibiotikum frakciókat automatikus frakciószedövel (Gilson 2010 gyűjtünk össze, csúcsdetektálási mechanizmus segítségével. A mozgó fázist Millipore Waters M600 Gi’adient HPLC System készülékkel alakítjuk ki, az injektálást Hitachi automata frakciógyűjtóvel végezzük. Az A82 846C antibiotikumot tartalmazó frakciókat egyesítjük, 30 ml térfogatra töményitjük és 50 ml-es HP-20 oszlopra viszszük. Az oszlopot vízzel mossuk, 0,5% ecetsavat tartalmazó viz/izopropanol, 95:5 eleggyel eluáljuk, 25 ml-es frakciókat gyűjtve. Az A82 846C antibiotikumot tartalmazó frakciókat egyesítjük (9-14.). bepároJjuk, fagyasztva szárítjuk. 37 mg tisztított A82 846C antibiotikumot nyerünk. Az A82 846C antibiotikum IF spektrumét (KBr) a 3. ábrán, tioglicerinben felvett FAB-tömegspektrumát a 6. ábrán, az acetátjának metil-szulfoxid-d6-ban 60 °C hőmérsékletén felvett NMR spektrumát (Bruker AM500 spektrométer, HDO szupresszált), a 9. ábrán mulatjuk be. 7. példa Az A82 816 antibiotikum sóinak előállításához 100 mg antibiotikumot feloldunk 10 ml ionmentes vízben. Az oldat kémhatását 5 n savval - sósavval, kénsavval vagy foszforsavval - pH=3 értékre állítjuk be. Az oldatot fagyasztva beszárítva megkapjuk a megfelelő sót,. Ha az oldat kémhatása alacsonyabb pll=-3 értéknél (például pH=2), a vegyület bomlik. Az alábbi kitermeléseket kaptunk: só A82 846A (mg) A82 846B (mg) * 8 I1C1 HzSOUlbPO.» 93,8192,5)110,8 88,1(75,1)-105,7 Az A82 8-I6B UV-spektvuma a következő: körülmények hullámhossz (nm) abszorbancia semleges 281 0.0587 savas 282 0.0613 báiikus 398/298 0.0023/ /0.0781 8. példa Az A82 846A antibiotikumot tartalmazó tabletták előállítását, az alábbi alkotórészekből készítjük: A82 846-foszfát 282.9 mg mikrokristályos cellulóz 101.1 mg kroszkarmallóz-nátrium 12.0 mg Providone 12.0 mg magnézium-sztearát 3.0 mg sztearinsav 4.0 mg tisztított viz 0.16 ml Megfelelő edénybe homogénné őröljük az A82 846A-foszfátot, a mikrokristályos cellulóz egy részét és a kroszkarmellőz-nátrium egy részét. Vizes Providone oldatot készítünk, és ezt hozzáadjuk a megórölt porhoz. A keveréket megfelelő méretűre granuláljuk és megszárítjuk. A száraz szemcsés anyaghoz hozzáadjuk a mikrokristályos cellulóz és a kio.szkarmellóz fennmaradt részét és a keveréket összeóröljük. Magnézium-sztearátol és s: tenrinsavat adunk hozzá és megőröljük, majd a kapott port tablettákká sajtoljuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 55 17
