198924. lajstromszámú szabadalom • Eljárás omega-helyzetben heterociklusos gyűrűt tartalmazó N-alkil-benz-[CD]indol-2 aminok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 198924 B 2 ás roham, a trombózis és a migrén. Az utóbbi időkben megjelent publikációkban, például a "Cardio-vascular Diseases: New Trends in Surgical and Medical Aspects" c., Barnett, H., Paoletti, P., Flamm., E. és Brambilla, G. szerkesztésében az Elsevier/North-Holland Biomedical Press kiadó gondozásában 1981-ben megjeleni könyv 137—150. oldalain ismertetik, hogy a tromboxán és a prosztaciklin közötti egyensúlynak szerepe van a keringési rendszerben. A prosztaciklin (PGI2) hatékony értágító és a vérlemezkék aggregálódását gátolja, míg a tromboxán (TXA2) erős érösszehúzó hatású és a vérlemezkék aggregálódásáért felelős. A TXA2-t a például vérlemezkékben lévő tromboxán-szintetáz enzim szintetizálja. Ha a TXA2 képződése megnő a PGI2 képződéséhez képest, vérlemezke aggregálódás, trombózis és érgörcs léphet fel /Lancet (i), 1216 (1977); Lancet, 479 (1977); Science, 1135 (1976); Amer. J. Cardiology, 4L 787 (1978)/. A TXA2 szintetáz inhibitorokról bebizonyították, hogy antitrombotikus hatásuk jobb, mint az aszpiriné /J. Clin. Invest., 65. 400 (1980); Br. J. Pharmac., 76. 3 (1982)/. Ismeretes továbbá a prosztaglandinok — beleértve a TXA2 és PGI2 vegyületeket — szerepe az ischémiás szívpanaszokban szenvedőknél (lásd a "Cardiovascular Pharmacology of the Prostaglandins" c. könyv 361 — 374. oldalán; a könyv Herman, A. G., Vanhoute, P. M., Denolin, H. és Goosens, A szerkesztésében, a Raven Press New York-i kiadó gondozásában 1982-ben jelent meg). Tengeri malacok és nyulak koszorúérrendszeri artériáiba TXA2 injektálásakor miokardiális ischémia és szubendokardiális nekrózis lép fel /Drugs of the Future, 7. 331 (1982); Proc. Jap. Acad., 53(B). 38 (1977); Eur. J. Pharmacol., 53. 49 (1978)/. A legutóbbi időkben végzett kutatások igazolták a PGI2 kedvező hatásait és kutyáknál az ischémiás miokardiumban a tromboxán-szintetáz szelektív gátlását /J. Cardiovascular Pharmacology, 4. 129 (1982)/. így tehát a tromboxán-szintétázt (és ezáltal a TXA2-t) szelektíven gátló és a PGI2 hatását károsan be nem folyásoló vegyületek felhasználhatók keringési megbetegedések, például ischémia és migrén kezelésére. Ráadásul a TXA2 képződés gátlása hatásos lehet a vérlemezkék aggregálódásának, illetve a trombózisnak a megelőzésében. 1 g/kg uretánt intraperitoneálisan beadva altatást végzünk, majd 19 - 24 hetes, Okamoto-Aoki törzsbeli, spontán magas vérnyomásban szenvedő hím patkány (a Taconic Farms, Germantown, New York állam, amerikai egyesült államokbeli cég szállítja) karotid artériájába illesztett kanülön keresztül 9,0 ml artériás vért veszünk és a vért polisztirolból készült kémcsőbe (amelybe előzetesen 1 ml 3,2%-os nátrium-citrát-oldatot mértünk be) gyűjtünk. Ezt követően 3 ml hideg fiziológiás sóoldattal hígítást végzünk, majd 15 percen át szobahőmérsékleten 468 x g-nál centrifugálunk. A vérlemezkékben dús vérplazmát (PRP) elkülönítjük. A vérlemezkéket a PRP 10 fércén át 1060 g-nál végzett centrifugájával elülönítjük, majd 4 ml hideg, oxigénnel átöblített, 7,4 pH-értékű Krebs-foszfátpufferrel mossuk. A 10 percen át 800 g-nál végzett centrifugálással elkülönített Krebs-foszfátpufferben újraszuszpendáljuk a 4,0 —6,0 • 10* lemezke/mikroliter koncentrációra hígítjuk. A TX képződésének gátlását úgy vizsgáljuk, hogy meghatározzuk a tromboxán B2 (TXB2), azaz a TXA2 egyik stabilis hidrolízisterméke koncentrációját. Jeges hűtés közben vizsgálati mintákat készítünk 200 mikroliter vérlemezkeszuszpenzióból, 50 mikroliter fiziológiás sóoldatból és 50 mikroliter, vizsgálandó hatóanyagot tartalmazó vagy nem tartalmazó fiziológiás sóoldatból mint hordozóanyagból. A kísérleti vegyületből 0,003 mólt oldunk 5 ml fiziológiás sóoldatban törzsoldatának elkészítésekor. Ezután 0,9%os fiziológiás sóoldattal sorozathígításnak vetjük alá a törzsoldatot úgy, hogy a kísérleti koncentrációk 1 • 104 és 1 • 10'^ mól közöttiek legyenek. A vizsgálati mintákat 10 percen át 37 °C-on mintegy 60 fordulat/perc sebességű metabolikus rázatóberendezésben inkubáljuk. A reakciót úgy szakítjuk meg, hogy a kémcsöveket jeges fürdőbe merítjük és 50 — 50 mikroliter 0,5 mólos citromsavoldalot adagolunk. A mintákat ezután 4°C-on 10 percen át 2000 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk, majd a felülúszót dekantáljuk. A TXB2 tartalmat mindegyik mintában direkt radioimmunvizsgálati módszerrel (RIA) határozzuk meg - a meghatározást a New England Nuclear bostoni (Massachusets állam, Amerikai Egyesült Államok) cég által szállított TBX2-specifikus RIA-készletet használva — és képződött pg TXB2 • perc'1, minta'1 értékben fejezzük ki, amelyekből a TXB2 képződésének százalékos gátlását kiszámoljuk. Az I. táblázatban a tromboxán szintetáz enzim százalékos gátlását adjuk meg arra az esetre, amikor a kísérleti vegyületet 1 • 10"4 mól koncentrációban vetettük tesztelésnek alá. I. Táblázat Tromboxán szintetáz enzim gátlása Kísérleti vegyület Százalékos _____________________________________gátlás N-/3-(lH-imidazol-l-il)-propil/-benz[cd]indol-2- -amin-dihidroklorid 85 6-bróm-N-/- (lH-imidazol- 1-il)-propil/-benz[cd]indol-2- -amin-dihidroklorid 85 N-/3-(lH-imidazol-l-il)-butil/-benz[cd]indol-2--amin-dihidroklorid 92 N-/l-(4-klór-fenil)-2-(lH-imidazol-l-il)-etil/-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
