198796. lajstromszámú szabadalom • Eljárás anioncserélő hordozólapok előállítására és szilárdfázisú eljárás és berendezés nukleinsavfragvensek szekvenciájának megállapítására
17 HU 198796 B 18 Ekkor megtörténik a DNS-fonal felszakadésa és a hordozóból történő elúció. A további eljárási lépéseket; - a rázatást, a hordozó fragmensek leválasztását, a centrifugélést, a hűtést, a liofilizálást - az 1 szekven- 5 táló tömbökben, illetve az 1 szekventáló tömbökkel végezhetjük el (a 4. ábrán a 13 - 19. sorszámú folyamat. A minták további feldolgozása a szétválasztás és a láthatóvá tétel céljából gélelekloforézissel történik. A minták 10 összekeverése, felcserélése kizárt, mivel megfelelő jelölések alkalmazásával csak egyféle módon illeszthetők össze a berendezés elemei: a 2 fedél, a 3 minta adagoló, a 4 hordozó lap tartó és az 5 szétvágó egység az 1 ^5 szekventáló tömbbel. További nagy előny a 20 hordozó lap darabkák, illetve az eluált minták az 1 szekventáló tömbből történő eltávolítás nélküli, egyidejű kezelése a gélelektroforézishez történő felvitel időpontjáig. 20 így jelentősen lecsökken az analízis ideje és az 1 szekventáló tömbben az 1.2 reaktor edények számának alkalmas megválasztásával az eljárás mintaátbocsátó-képessége is nagy. 25 Az ábrákon alkalmazott jelölések 1. Szekventáló tömb 1.1 Alaptömb 1.2 Reaktor edények 1.3 Rögzítés 30 1.4 Egymással szilárd összeköttetésben vő reaktor edények lé-2. Fedél 2.1 Rugalmas tömítés 35 2.2 Merev lap 2.3 Rögzítő elem 2.4 Dugószerű kiemelkedések 3. Minta adagoló 40 3.1 Kapilláris taró 3.2 Kapillárisok 3.3 Kapilláris csúcs 4. Hordozó lap tartó 45 4.1 Alaplap 4.2 Mélyedés 4.3 Vezető lap 4.4 Furatok 4.5 Rögzítés 50 4.6 Hordozó lap 5. Szétvágó egység 5.1 Nyomó lap 5.2 Szétvágó rudacskák 55 6. Az analízis előkészítése az 1, 3, és alkalmazásával 4.6 7. Mosás és szárítás 8. Kémiai modifikáció 60 9. A 20 hordozó lap darabkák szélvágása 4.6 -ból az 5 alkalmazásával 10. A vizes piperidin-oldat hozzáadása 11. Lezárás a 2 fedéllel 12. Melegítés a reakció hőmérsékletére 65 13. Centrifugálás 14. A 20 eltávolítása és a 13. lépés megismétlése 15. Mélyhűtés 36. Liofilizálás 11. Víz hozzáadása és rázatás Í8. A 13., 15., 16. és 17. lépés ismétlése 19. Az elektroforézises eljárás puffer-oldalának hozzáadása 20. Hordozó lap darabka SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás kémiailag vagy fotolitikusari eluálható, mechanikailag stabil, anioncserélő tulajdonságú hordozó lapok előállítására, azzal jellemezve, hogy egy meghatározott alakú, vagy meghatározott alakkal nein rendelkező ismert makromolekulás anyagot - amely egy (I) általános képletű Y(I) vegyülettel - a képletben /R1 H2N-R-N—R2 \.R3 R jelentése 1-4 szénátoi'nos alkilesoport, adott esetben egy niLrocsoporttal és/vagy 1-4 szénatoinos alkanoil-metil-csoporttal szubsztitulát benzilcsopoi-L, R1, Rz és R3 jelentése 1-4 szénatomos alkilcsoport, vagy hidrogénatom, és Y jelentése haiogénatom - reagálhatunk, amelyet adott esetben in situ állítunk elő, egy (II) [Y-R-NHa]«Y- (II) általános képletű vegyület - a képletben Y és R jelentése u fenL megadott -egy (III) /RI N—- R2 \R3 általános (III) képletű tercier am innal a képletben R1, R2 és R3 jelentése a fent megadott - való reagáltatásával. (Elsőbbsége: 1984.08.06.) 2. Szilárdfázisú eljárás nukleinsavfragmensek szekvenciájának megállapítására, az 1. igénypont szerint előállított mechanikailag stabil, anioncserélő tulajdonságú hordozó lapok alkalmazásával, azzal jellemezve, hogy a fragmenseket a hordozó lapokon ismert módon megkötjük, az egy vagy több megkötött fragmenst - adott esetben feleslegben lévő - dimelil-szulfoxiddal, hangyasavval, kálium-permanganáttal és hidroxil-aminnal kémiailag modifikáljuk, mossuk, a hordozó lapokat a kémiai reakcióknak megfelelően szétválogatjuk, piperidinnel reagálhatjuk, és egyidejűleg, vagy ezt követően piperidinnel, vagy egy primer, szekunder vagy tercier amirmal 11
