198734. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rezofurin szk-ok glikozidjainak előállítására, eljárás glikozidázok és szacharid láncokat hasító enzimek aktivitásának meghatározására és diagnosztikumok enzimek kimutatására
1 HU 198734 B 2 'H-NMR (DMSO-dt,): 1,8-2,2 (s, 48H, COOCH3), 3,8-5,5 (m, 35H, H-l - H-6); 6,3 (s, 1H, NH). Irodalom: R. Schmidt, M. Slumpp. Liebig’s Ann. Chem. 1983. 1249-1256. Az előbbiekhez hasonlóan állítjuk elő még a peracelil-maltolrióz-triklóracelimidátot is. Kitermelés: 93%. R( = 0,45. d) Rezorufinil-/?-D-maltopentaozid 72 g ()0,44 mól) peracetil-maltopentaozil-«-D-triklóracetimidátot és 4,4 g (0,02 mól) rezorufint 1 liter absz. DMF-ben szuszpendálunk. Hozzácsepegtetünk — szobahőmérsékleten — 6,3 ml (0,05 mól) BF3.0Et2-t és az elegyet 8 órán át a nedvesség kizárása mellett 60 °C-on kevertetjük. Szobahőmérsékletre való lehűlés után kb. 500 ml Al203-on szűrjük és az oxidot 5 liter etilacetáttal utánamossuk. A szűrletet vákuumban szárazra pároljuk, a maradékot 100 ml absz. metanolban oldjuk és 2 g NaOCH3-al 3 órán át a nedvesség kizárása mellett reagáltatva dezacetilezzük. A szuszpenziót vákuumban szárazra pároljuk, a maradékot 100 ml vízben felvesszük, 2 n sósavval pH 6-ra állítjuk be és felvisszük egy kb. 500 ml térfogatú (0 8 cm) diaion oszlopra. Ezt először 4 liter vízzel, majd 3 liter 20%-os izopropanolos oldattal eluáljuk. Az eluátumoL kb. 40 mi re bepároljuk és RP-18-Flash oszlopon (0 = 4 cm, h = 39 cm) eluálószerként 15%-os izopropanollal 50 ml-es részletekben kromatografáljuk. A rezorufinil —maltopenaozidot tartalmazó frakciókat egyesítjük, vákuumban kb. 20 ml térfogatra pároljuk be és RP—18 —MPLC oszlopon 10 ml-es részletekben 15%-os izopropanollal mint eluálószerrel kromalografáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk, végül liofilizáljuk. Kitermelés: 2,8 g (az elméleti 14%-a) narancsszínű liofilizátum, HPLC: RP-18 oszlop, 1 ml/perc, 17% izopropanol, rt = 2,95 perc, rezorufin-tartalom (G5): 97%. 'H-NMR (DMSO-d6): 3,0-6,0 (m, 51H, OH, H-1 - H-6); 6,2 - 8,0 (m, 6H, ArH). Irodalom: R. Schmidt, G. Grundier: Synthesis 1981, 885- -887. 21. példa a) Br-u-D-maltozid A peracetilezett cukorból 25 mmólt 50 ml etilacelátban oldunk. Csepegtetéssel hozzáadunk 50 ml (30%-os) jégecetes HBr oldatot és a reakcióelcgyet szobahőmérsékleten a nedvesség kizárása mellett kevertetjük. Végül 300 ml diklórmetánt adunk hozzá és 1 liter jeges vízre öntjük. A szerves fázist elkülönítjük és egymás után vízzel, telített NaHC03 oldattal és vízzel kirázzuk. A szerves fázist Na2S04 felett szárítjuk, majd vákuumban szárazra pároljuk. A termék további tisztítás nélkül felhasználható a következő reakcióban. Cukor Kitermelés Rf szilikagél 60,(toluol/aceton 7/4) maltóz 88% 0,72 maltotrióz 88% 0,65 maltotetraöz 93% 0,61 maltopentaóz 91% 0,57 maltohexaóz 93% 0,53 maltohaptaóz 95% 0,55 Irodalom: Brauns, J. Am. Chem. Soc. 51, 1929,1830. b) Rezorufinil-;e>-D-maltozid (a cukor-komponenseket az alábbi táblázatban adjuk meg): 50 mmól rezorufint és 25 mmól Ag20-t 800 ml absz. CH3CN-ben 3A molekulaszitával szuszpendálunk és 4 órán át visszafolyató hűtő alatt forraljuk az elegyet, a nedvesség kizárása mellett. 62,5 mmól Br-.i-D-peracetil-maltozidot 200 ml absz. CHH3CN-ban oldunk, ezt hozzáadjuk a rezorufin oldathoz és az elegyet 6 órán át visszafolyató hűlő alatt forraljuk. További 18 órán át kevertetjük az elegyet szobahőmérsékleten, majd 10 g A-szenet adunk hozzá és rövid időn át viszszafolyató hűtő alatt forraljuk. Az elegyet 100 g Al203-n (IJI/N aktivitási fok) szűrjük át és a szűrőt 5 liter ecetsavval utánamossuk, A szűrletet vákuumban szárazra pároljuk, a maradékot 1 liter absz. alkoholban oldjuk és 5 g NaOCH3 hozzáadása után, a nedvesség kizárása mellett szobahőmérsékleten kevertetjük. A szuszpenziót vákuumban szárazra pároljuk, a maradékot 200 ml vízben oldjuk, a pH-t 7-re állítjuk be és az oldatot felvisszük egy 500 ml-es Diaion HP —20 oszlopra (Mitsubishi, Japán). Ezt 15 liter vízzel mossuk és 10 liter 15%-os izopropanol oldattal eluáljuk. Az eluátumot vákuumban 100 ml-re pároljuk be, az imidát módszer szerint RP-18- MPLC oszlopon izopropanol oldattal kromalografáljuk és liofilizáljuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 14
