198733. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az N-acetil-neuraminsav sói és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 198733 B 2 6. példa N-Acelil-neuraminsav-nátriumsó hatása csillés sejt rotáló mozgására. Az emberi légutakból és béka szájpadlásból származó csillószőrös sejteket használtunk. A sejtcsoportoknak a csillószőrcsapások következtében fellépő rotációját vizsgáltuk N-acetil-neuraminsav-nátriumsó alkalmazása előtt és után, hogy megerősítsük a hatóanyagnak a csillószőrös sejtekre való hatását. 10 A humán csillószőrös sejteket bronchoszkóp segítségével gyűjtöttük normális légcsőből. A csillószőrös sejteket a bronchus vakarásával választottuk le, miközben a bronchoskópon keresztül figyeltük a műveletet. A béka csillószőrös sej- 15 teket a palatális nyálkahártya kaparásával vettük, anélkül, hogy különösebben óvatosak lettünk volna. Az így nyert csillószőrös sejteket a Gibco Company által gyártott Medium 199-ben szuszpendáltuk, és a csillómozgás következtében rotá- 20 ló mozgást végző néhány sejtből álló csillószőrös sejlcsoportokat mikrofecskendővel szívtuk fel oly módon, hogy elkerüljük a sejtek károsodását, majd fáziskontraszt-mikroszkópon át végeztük a megfigyelést. A sejtcsoportokat átvittük egy 25 fedőlemezre, és egy csepp csirkeplazmát (Difco Company terméke) és egy csepp 50%-os csirkeembrió-extraktumot adtunk a sejtekhez, amelyek így csomókat képeztek. A csomókban a rotáló mozgást videofelvevővel felvettük, és megmértük 30 a percenkénti rotációk számát. A hatóanyagokat a Medium 199-ben oldottuk fel, és egy Rosakamrához csatlakozó csövön át injektáltuk be. Az injektálás után 5, 10 és 15 perccel videofelvevő segítségével felvettük a rotáló mozgást, és 35 mértük a körforgások számát. N-Acetil-neuraminsav-nátriumsó (10“* — lü'1 rng'rnl) hozzáadására a csillószőrös sejtek rotáló mozgása fokozatosan gyorsul közvetlenül a hozzáadástól kezdve. A hozzáadás után 5 perccel, 10 perccel és 15 perccel megvizsgáltuk a 10’3 —10"2 5 mg/ml hatóanyagot kapott lemezeket. Ezeken a lemezeken a percenkénti forgások sebessége körülbelül 25%-kal nagyobb volt, mint a Medium 199-ben. Azt is bizonyítottuk, hogy a csillószőrös sejtek rotáló mozgása a dózistól bizonyos mértékben függően fokozódik 10‘3 — 3xl0’2 mg/ml terbutalin, azaz 5-[2-(terc-butil-amino)-l-hidroxi-etil]-l,3-dihidroxi-benzol hozzáadására. A hatás különösen jól észlelhető volt a hozzáadás után 5 perccel. Bizonyítottuk azt is, hogy a csillószőrös sejtek rotáló mozgásának sebessége 10'3 mg/ml és 3 x xlü'3 mg/ml acetil-kolin hozzáadására is gyorsult. A rotáló mozgás sebességcsúcsait körülbelül 10 perccel és 5 perccel a hozzáadás után észleltük, amikor a hozzáadott mennyiség 10'3 mg/ml illetve 3xl0'2 mg/ml volt. Mindkét esetben a rotáló mozgás a hozzáadás után 13 perccel abbamaradt. Jelentős rotációszámol észleltünk 10'3 mg/ml N-acetil-neuraminsav-nátriumsó alkalmazásakor. Terbutalin általános tendenciát mutatott a rotáció növelésére 10"4 —10"1 mg/ml koncentrációnál. Acetil-kolin 10'3 és 10"2 mg/ml között koncentrációban mutatott fokozó hatást a rotációra a dózistól bizonyos függőségben. Ezekből a tényekből érthető, hogy az N-acetilneuraminsav-nátriumsó ugyanolyan hatásosan használható köptetőként, mint az N-acetil-neuraminsav kalciumsója. 40 4. TÁBLÁZAT N-acetil-neuraminsav-nátriumsó hatása rotáló csillósejt explantátumra Gyorsulás: átlagos értéke ± standard deviáció (%’) Hatóanyag Adagolt mennyiség (mg/ml) N Adagolás utáni idő (perc) 5 10 15 Kontroll 8-1,0± 5,8 ~0,9± 6,8 —1,9± 6,8 ío-4 3-5,2±12,2 1,6± 4,6 6,7± 3,0 Tetrabutalin 10‘3 51,2± 36,0 37,2± 35,5 42,1 ±32,8 10'2 18,6± 0,3 24,8± 3,5 2,7± 7,4 10^ 2-1,7± 13,4 0,8 ± 12,8 14,6± 6,8 Acctil-10‘3 27,8±12,2 10,6± 15,0 20,8± 26,4-kolin 10'2 58,1 ±38,1 52,0± 32,6 44,5± 22,0 N-Acelil-10-4 7 — 3,4± 9,7 0,6± 10,6 — 5,0± 8,2-neuraminsav-10-3 11,6129,8 20,7± 27,5 16,2± 32,3-nátriumsó 10'2 1,5 ±11,6 2,1 ±18,2 3,7±29,3 101 0,0± 5,8 4,7± 6,6 15,4± 9,3 ‘Gyorsulás (A%) * (Ciklus hatóanyaggal/ciklus kontrollal— 1) x 100 A > 20,0 jellemző. 5
