198699. lajstromszámú szabadalom • Eljárás benzoxazin- és benztiazin-ecetsav származékok és hatóanyagként ezen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 198699 B 2 tásban a vegytiletck szubsztituensei összehasonlíthatók. A cukorvetegek kezelése rendszerint hosszú időt igényel, ezért a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek, amelyek alacsony dózisokban is ilyen kiváló hatást mutatnak, nagyon ígéretes gyógyszer-hatóanyagoknak tűnnek. 3. Vérlemezke-aggregációt gátló hatás: A 3,4dihidro-3,8-diizopropil-3-tioxo-2H-l,4- -benzoxazin-4-ecetsav vérlemezke-aggregációt gátló hatását mosott patkány-vérlemezkéken 10 vizsgáljuk, az alábbiak szerint: 6 — 7 hetes, hím Spargue-Dawley patkányok hasi aortájából térfogatának 1/10-ed részében 3,8%-os trinátrium-citrát-oldatot tartalmazó 15 műanyag fecskendőbe gyűjtjük a vért, éteres altatás közben. A vérlemezkében gazdag plazmát (PRP-t) szobahőmérsékleten, 150x g-vel 15 percen át végzett centrifugálással különítjük el a vérből. Mosott vérlemezke előállítása céljából a 20 PRP-t 1500 x g-vel 10 percen keresztül centrifugáljuk, és a kicsapódott vérlemezkéket Tyrodeoldatban újraszuszpendáljuk. A vérlemezkék száma 7xl(r sejt/mm3. A vérlemezke-aggregációt turbidimetriás eljárással mérjük, aggregométert (Nikko Bioscience, Model PAR —4M, Tokió) 5 használva. A vizsgálandó vegyüleleket 10 p\ vízben oldjuk és 250 pl mosott vérlemezke-szuszpenzióhoz adjuk, majd az elegyet 37 °C-on 3 percen át inkubáljuk, és ezután hozzáadunk 10 p! aggregálószert (5 — 10 pl kollagént (Nikko Bioscience) vagy 10 pmól/1 végkoncentrációban ADP-t (Shigma, St. Louis, MO, USA)] A vizsgálat vegyülct általi %-os aggregációt osztjuk a kontroliban mért %-os aggregációval, és az eredményt 100-zal szorozzuk. Az eredményeket a 2. táblázatban ismertetjük. A 2. táblázat eredményei azt mutatják, hogy a vizsgált vegyület gátolja a mosott vérlemezke kollagénnel vagy ADP-vel indukált aggrcgációját, dózistól függő módon. A gátló hatás még erőteljesebb, mint az indometaciné, ADP-vel indukált aggregáció esetén. 2. táblázat Induktor Vizsgált vegyület koncentrációja Indometacin koncentrációja 3xl0"5 (mól/1) 6xl0'5 1x10" 3x1 O'4 (mól/1) 1x10" 3x10" Kollagén 74,5±5,5* 46,5 ±1,3** 31,8±0,9** 24,1 ±3,4** 28,5± 1,9**ADP-90,0± 6,0 42,0±7,1 101,5± 8,4 97,2±6,4 átlagérték ± standard deviáció (N = 3) 35 **:p< 0,001 és *: p<0,01 kontrollal szemben (víz) 4. Akut toxieitás vizsgálata: A 3,4-dihidro-2,8-diizopropil-3-tioxo-2H-l,4- 40 -benzoxazin-4-ecetsav akut toxieitását egéren és patkányon vizsgáljuk. A vizsgálandó vegyület 5%-os gumiarábikum oldattal készült szuszpenzióját különböző dózisokban orálisan adagoljuk 4 hetes hím ICR ege- 45 reknek, illetve 5 hetes Wistar patkányoknak, majd 14 napon keresztül megfigyeljük az állatok pusztulását. Minden csoport 5 állatból áll. Az eredményeket a 3. táblázatban ismertetjük. Kísérleti ld50 állat (mg/kg). egér 1800 patkány 2830 A találmányt közelebbről az alábbi példákkal kívánjuk ismertetni, a korlátozás szándéka nélkül. 1. példa (1) 19,1 g 2-izopropil-2H-l,4-benzoxazin-3- (4H)-on 200 ml dimetil-formamiddal készült oldatához 4,0 g 60%-os olajos nátrium-hidrid-diszperziót adunk, és az elegyet szobahőmérsékleten 30 percen keresztül keverjük, majd jeges hűtés közben hozzácsepegtetünk 10 ml metil-bróm-acetátot 200 ml dimetil-formamidban oldva. Az elegyet jeges hűtés közben 1 órán keresztül keverjük, majd vízzel hígítjuk és etil-acetáttal extraháljuk. Az extraktumot vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és szárazra pároljuk. 26,0 g (98,9%) metil-3,4-dihidro-2- -izopropil-3-oxo-2H-l,4-benzoxazin-4-acetátot kapunk, olaj formájában. (2) 26,0 g metil-3,4-dihidro-2-izopropil-3-oxo-2H-l,4-benzoxazin-4-acetát, 44,4 g foszfor-pentaszulfid és 250 ml toluol elegyét 3 órán át viszszafolyató hűtő alatt forraljuk. Az elegyet lehűtjük, az oldhatatlan anyagot szűréssel eltávolítjuk és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékhoz 200 ml izopropil-étert adunk, és az oldhatatlan anyagot szűréssel eltávolítjuk. Az oldószert elpárologtatjuk, a maradékhoz hexánt adunk. 22,5 g 65 6
