198570. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vérplazma tromboxán B2 tartalmának radioimmunológiai meghatározására
7 HU 198570 B 8 1. Eljárás vérplazma tromboxán B2 (továbbiakban TXB2) tartalmának radioimmunológiai - antigén-antitest kötésen alapuló - meghatározására, melynek során megmérjük radioizotóppal jelzett nyomjelző vegyület (továbbiakban radioligand) specifikus antitesttel való kötődésének változását, ismert TXB2 koncentrációjú standard hígítási sorozat, valamint ismeretlen minták jelenlétében, majd a standard hígftási sorozat és a hozzájuk tartozó kötésváltozások alapján kalibrációs görbét készítünk és az ismeretlen minták koncentrációját az általuk okozott kötésváltozások függvényeként a kalibrációs görbéből meghatározzuk, azzal jellemezve, hogy radioligandk'ént (I) képletű jód-125 izotóppal jelzett, nagy fajlagos aktivitású tromboxán B2- tirozin-metilészter származékot alkalmazunk, amelyet a specifikus antitesttel 8-anilin-l-naftalin-szulfonsavat tartalmazó pufferoldatban, egyrészt az ismert TXB2 koncentrációjú standard oldatokkal, az ismeretlen mintákkal fajazonos, TXB2-t nem tartalmazó vérplazma, másrészt az ismeretlen vérplazma-minták jelenlétében reagáltatunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 3000 és 60.000 - előnyösen 20.000 és 40.000 - cpm közötti beütésszámú radioligandot alkalmazunk. 3. Az 1., vagy 2. igénypont szerinti eljárás, ázzál jellemezve, hogy antitestként, előnyösen nyúlban előállított anti-TXB2 immunsavót, vagy immunplazmát alkalmazunk olyan mennyiségben, amely az inaktív, TXB2- -t nem tartalmazó mintában a radioligand legalább 20-80%-át - előnyösen 30-50%-át - képes megkötni. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzál jellemezve, hogy a 8-anilin-l-naftalin-szulfonsavat 0,01-0,5% - előnyösen 0,1% - végkoncentrációban alkalmazzuk. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy pufferoldat-5 ként 6-9 pH-jú - előnyösen 7,0-7,5 pH-jú -, 0,01-0,2 mól/liter - előnyösen 0,05-0,1 mól/liter - koncentrációjú, előnyösen 0,1% zselatint tartalmazó foszfát-puffért alkalmazunk. 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti 10 eljárás, azzal jellemezve, hogy a TXBz-t nem tartalmazó vérplazmát kevert, normál vérplazmából állítjuk elő oly módon, hogy abból a TXB2 hatóanyagot 0,5-10% - előnyösen 1- -2% - aktív szénnel kivonjuk. 15 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az ismeretlen vérplazmamintákat 0,001-1 mmól/liter - előnyösen 0,1 mmól/liter - indometacint és 0,05- -0,5% - előnyösen 0,2% - etilén-diamintetra- 20 ecetsav célszerűen diriátriumsóját tartalmazó vérminták 0 °C és 10 °C - előnyösen 0 °C és 5 °C - hőmérséklet közötti, 100-5000 x g - előnyösen 1000-2000 x g - nehézségi gyorsulással történő centrifugálásával állítjuk elő. 25 8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a reakcióidőt 1 és 50 óra - előnyösen 15 és 24 óra - között, a reakcióhőmérsékletet pedig 0 °C és 40 °C között tartjuk. 30 9. Az 1-8, igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a radioligand kötött és nem kötött frakcióinak elválasztására 0-1% - előnyösen 0,5% - Dextrán T-70-et és 0,1-5% - előnyösen 0,5-1% - aktív szenet 35 tartalmazó, 6-9 pH-jú - előnyösen 7,0-7,5 pH-jú - célszerűen 0,01 mól/liter koncentrációjú foszfát-pufferoldatot használunk. Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest - A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető R-4861 - KJK 90.2229.66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Benkó István vezérigazgató 6
