198509. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 17-es helyzetben spiro-gyűrűt tartalmazó szteroidok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 matografálássál tisztítunk (ciklohexán/etil-acetát 7/3, majd 8/2). ÍR spektrum (CHC13): C=0 konjugált 1,653, -C=C- aromás 1,598, 1,556, 1,491 cm’1. 36. példa (17 R) 1 1-béta-/4-/2-(dimetil-amino)-etoxi/-fenil/-spiro(ösztra-l ,3,5(10)-trién-l 7,2'-(5H)-furán)-3-ol és acetálja 1. Fenol-acetát előállítása A 28. példában leírtak szerint járunk el, a kiindulási anyag 0,250 g 20. példa szerinti vegyület, 0,25 ml ecetsavanhidrid és 0,2 ml acetil-bromid. Szilikagélen való kromatografálás után 0,150 g kívánt acetát-vegyületet nyerünk. 2. Elszappanosítás A továbbiakban a 28. példa szerint járunk el, kiindulási anyagként 70 mg fenit acetát-szárrnazékot, 1,5 ml metanolt, 0,1 ml nátrium-hidroxidot alkalmazva, amikoris 60 mg kívánt terméket nyerünk. ÍR spektrum (CHCI3): OH 3,600, aromás 1,610, 1,581, 1,512, 1,086 cm'1. Az előzőekben leírtakhoz hasonlóan eljárva a következő vegyületeket állítottuk még elő: — (17 R) 4’,5-diliidro-ll-béta-/4-/metil-(dimetil-amino-etil)-amino/-fenil/-spiro(ösztra4,9-dién-17,2'-(3H)-furán)-3-on, — (17 R) 4 ,5’-dihidro-l 1 -béta-/4-/metil-(dimetil-amino-etil)-amino/-fenil/-spiro(ösztra-l,3.5(10)-trién-17,2’-(3H)furán)-3-ol, — (17 S)4',5-dihidro-ll-béta-/4-(dimetil-amino)-fenil/-13-alfa-metil-spiro-(gona4,9-dién-17,2 -(3H)-furán)-3-on, — (17 R)4',5’-dihidro-ll-béta(/4-(dimetil-amino)-fenil/-13-alfa-metil-spiro-(gona4,9-dién-l 7,2 ’-(3H)-furán)-3-on. Gyógyszerkészítmények előállítása Tabletta készítményt állítunk elő a következő öszszetétel szerint: 4. példa szerinti vegyület 50 mg egyéb alkotók (talkum, keményítő, magnézium-sztearát) 120 mg Biológiai vizsgálatok 1. Hormon receptorokra kifejtett hatás vizsgálata Nyúl-uterus progestogen receptor 1 kg tömegű nemileg éretlen nyulaknak szubkután 25 mg estradiolt adagolunk, majd 5 nappal később leöljük őket, a méhüket eltávolítjuk, méijük és Potter-féle teflon edényben puffer oldatban (TS:9 trisz 10 mmól, szacharóz 0,25 mól, CH1 pH= 7,4) 0 °C hőmérsékleten homogenizáljuk (1 g szövetet 50 ml TS-ben). A kapott homogenizátumot ezután 0 °G;-on ultracentrifugáljuk (105.000 g x 90 perc), majd a felülúszó alikvot részét t ideig tridált R vegyület (17,21 -dimetil-19-nor-4,9-pregnadién-3,20-dion) T konstans koncentrációja mellett, hideg R vegyület, hideg progesteron vagy hideg vizsgálandó vegyület jelenlétében (mindegyik 0—2500 x 10’9 mól növekvő koncentrációban 0 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Ezután mérjük a megkötött triciált R vegyület B koncentrációját karbon-dextránon mutatott adszorpciójuk alapján. Patkány thymus glukokortikoid receptor 16 200 g tömegű hím Sprague-Dawley patkányok mellékveséit eltávolítjuk, majd 4 -8 nappal később az állatokat leöljük, thymusukat eltávolítjuk és Plotter-féle teflon edényben puffer oldatban (trisz 10 mmól, szacharóz 0,25 mól, ditiotreitol 2 mmól, HC1 pH= 7,4) 0 °C-on homogenizáljuk (1 g szövetet 50 ml puffer oldatban).A kapott homogenizátumot ezután ultracentrifugáljuk (105.000 g x 90 perc) 0 C-on, majd a felülúszó alikvot részét t ideig tridált dexamethason T konstans koncentrádója mellett, hideg dexamethason vagy hideg vizsgálandó vegyület jelenlétében (mindegyik 0-2500 x 10‘9 mól növekvő koncentrádóban) 0 °C-on inkubáljuk és mérjük a megkötött dexamethason B koncentrádóját. Relatív kötési affinitás számítása A relatív kötési affinitást (RBA) minden esetben azonos módon számoltuk: A következő két görbét vettük fel: a megkötött tridált hormon százalékos mennyisége B/T, a hideg referenda hormon függvényében, és B/T a hideg vizsgálandó vegyület logaritmikus koncentrádójának függvényében. Ezután meghatároztuk az 150 = B B = ( TMax ♦ -Sk) / 2 egyenletet, ahol Bmax/Tjelentése a T koncentrádónál megkötött tridált hormon %-os mennyisége, és Bmjn/T jelentése a T koncentrádónál, nagy mennyiségű (2500 x 10'9 mól) hideg hormon jelenlétében megkötött tridált hormon mennyisége. Az lso egyenes és a görbék metszéspontja megadja a hideg referenda hormon (CH) és a hideg vizsgálandó vegyület (CX) azon koncentrádóját, amelynél a tridált hormon receptoron való kötésének gátlása 50%-os. Az RBA értékét a következőképpen számoljuk ki: RBA= 100 ^ (CX) A vizsgálatoknál a következő eredményeket kaptuk: lnkubádós idő Progestogen Glukokor- Példa 0 °C tikoid szerinti vegyület 2 h 24 h 4h 24h 1 62 307 118 48 2 28 '222 142 96 3 35 242 56 41 4 78 388 69 39 Értékelés A vizsgált vegyületek, különösen a 4. példa szerinti vegyület jelentős affinitást mutat a glikokortikoid és progesztogén receptorokhoz. Ennek alapján kimondható, hogy a Vegyületek a glukokortikoidok és a progesztogének agonistái vagy antagonistái. 198.509 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 20
