198492. lajstromszámú szabadalom • Eljárás piridazo-diazepin származékok és az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 193492 B 2 A (II), (V), (VI), (VII) és (VIII) általános képletű vegyületek a (IX) általános képlettel jellemezhetők (a képletben R1, R2 és R3 jelentése a fent megadott és S nitro-, amino- vagy 2-nitro-guanidino-csoportot képvisel). A (IX) általános képletű vegyületek újak. Az R3 helyén hidrogénatomot tartalmazó (III) általános képletű vegyületek újak, ismert vegyületekkcl analógak. Az R3 helyén benzilcsoportot tartalmazó (III) általános képletű vegyületeket a megfelelő, R3 helyén hidrogénatomot tartalmazó (ül) általános képletű vegyületekből reduktív benzilezéssel állíthatjuk elő. A (IV) általános képletű kiindulási anyagok ismertek vagy ismert vegyületekkel analógak. Az (I) általános képletű piridazodiazepin-származékok az angiotenzin I-nek angiotenzin Il-vé történő átalakítását előidéző angiotenzin-átalakító enzimet (ACE) gátolják és ezért antihipertenziv hatással rendelkeznek. Ezen kívül a találmányunk szerinti eljárással előállítható új vegyületek előre nem várt módon nyújtott hatást mutatnak. Az (I) általános képletű vegyületek angiotenzinátalakító enzim gátló hatását az alábbi invitro teszttel igazoljuk: Az alkalmazott módszer Santos, R.A.S., Kreiger E.M. és Greene L.J. módszerén [Hypertension 7, 244-252 (1875)] alapul.Antiotenzin-átalakitó enzimet (nyultüdő) különböző koncentrációjú teszt-vegyület jelenlétében vagy anélkül, 90 percen át,37 "C-on millimól nátrium-kloridot tartalmazó 0,1 mólos kálium-foszfát-pufferben (p 7,5) inkubálunk (a teszt-vegyületként használt észtereket a teszt elvégzése előtt sertésmájészterázzal történő kezeléssel hasítjuk). A reakciót oly módon indítjuk be, hogy 250 mmól v ágső koncentrációban angiotenzin I-t adunk hozzá. A reakcióelegy végtérfogata 0,25 ml. A reakcióelegyet 37 °C-on 30 percen át állni hagyjuk, majd a reakciót 1,45 ml 0,3 mólos nátrium-hidroxid-oldat hozzáadásával befejezzük. Ezután 100 ml 0,2 tömeg/tárfogat %-os metanolos o-ftalíl-dialdehid-oldatot adunk hozzá, majd az oldatot 10 perc múlva 200 mmól 3 mólos sósavval megsavanyítjuk. A kapott oldatot fluoreszcensz spektrometriás meghatározásnak vetjük alá, 365 nm és 500 hm gerjesztési és emissziós hullámhosszt alkalmazva. Az IC50 értéket kiszámítjuk. IC50 értéknek a teszt-vegyület azon koncentrációját tekintjük, amely az angiotenzin I-nek angiotenzin Il-vé történő átalakítását 50 %-kal csökkenti. A fenti teszt során a 9(S)-[l(S)-karboxi-3-(4-guanidino-fenil)-propil-amino]-oktahidro-10-oxo-6H-piri dazo [l,2-a][l,2]-díazepin-l(S)-karbonsav-dihidrobromid IC50 értéke 0,6 nmől. Az (I) általános képletű vegyületeket és gyógyászatilag alkalmas sóikat a gyógyászatban a hatóanyagot és inert kompatibilis gyógyászati hordozóanyagokat tartalmazó készítmények alakjában alkalmazhatjuk. Hordozóanyagként szerves vagy szervetlen, enterális (pl. orális) vagy parenterális adagolásra alkalmas anyagok alkalmazhatók, pl. víz, zselatin, gumiarábikum, laktóz, keményítő, magnézium-sztearát, talkum, növényi olajok, poli(alkilénglikol)-ok, vazelin stb. A hatóanyag szilárd (pl. tabletta, drazsé, kúp vagy kapszula) vagy folyékony (pl.oldat, szuszpenzió vagy emulzió) formában készíthető ki. A gyógyászati készítmények standard gyógyszeripari műveleteknek (pl. sterilezésnek) vethetők alá és/vagy adjuvánsokat (pl. tartósító-, stabilizáló-, nedvesítő-vagy emulgeálószereket, az ozmózisnyomás változását előidéző sókat vagy puffereket) és kívánt esetben gyógyászatilag értékes további anyagokat tartalmazhatnak. Az (I) általános képletű piridazodiazepin-származékok napi dózisa felnőtteknél általában kb. 0,1 mg és kb. 100 mg mg/kg testsúly közötti érték, előnyösen kb. 1-50 mg/kg testsúly. A fenti dózist egyszerre vagy több részletben adhatjuk be. A fenti dózis-tartomány azonban csupán tájékoztató jellegű; az alkalmazandó dózis ennél kisebb vagy nagyobb is lehet és az adott eset összes körülményeitől (pl. az alkalmazott hatóanyag hatáserőssége, az adagolás módja, a kezelendő indikáció súlyossága, a beteg állapota stb.) függ, a kezelőorvos előírásának megfelelően. Az R3 helyén hidrogénatomot tartalmazó, egyéb (IX) általános képletű vegyületek is angiotenzin-átalakitó enzimgátló hatással rendelkeznek és antihipertenziv szerek hatóanyagaként alkalmazhatók. Eljárásunk további részleteit az alábbi példákban ismertetjük anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. 1. példa 0,70 g 9(S)-{l(S)-karboxi-3-[4-(2-nitro-guanidino)-fenil]-propil-amino)-oktahidro-10-oxo-6H-piridazo [l,2-a][l,2]- diazepin-1 (S)-karbonsav-hidrobromidot 16 ml ecetsav, 4 ml víz és 4 csepp hidrogén-bromid elegyében 10 %-os palládium/szén katalizátor jelenlétében szobahőmérsékleten, atmoszférikus nyomáson 72 órán át hidrogénezünk. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk és as zürletet bepároljuk. A visszamaradó olajat 50 ml vízben oldjuk és az oldatot liofilizáljuk. Csaknem fehér szilárd anyag alakjában 0,735 g 9(S)[ 1 (S)-karboxi-3-(4-guanidino-fenil(-propil-amino] -oktahidro-10-oxo-6H-piridazo[ 1,2-a][ 1,2] diazepin-1 (S)karbonsav-dihidrobromidot kapunk. NMR: 5h(CD30D, 300 MHz): 1,44 (1H, m), 1,68-1,98 (4H, mi, 2,04-2,36 (4H,m), 2,42 (1H, m), 2,63 (lH,m), 2,82-2,98 (2H, m), 3,04 (1H, széles, d), 3,17 (lH,m), 3,48 (lH,m), 4,01 (lH,t) kb. 4,90 (2H, homályos), 7,25 (2H, d) és 7,41 (2H, d). MS: m/e 447(20 % [M+H]+) és 211 (100). Akiindulási anyagként felhasznált 9(S)-{l(S)-karboxi-3-[4-(2-nitro-gi nidino)-fenil]-propil-amino] oktahidro-10-oxo-6H-piridazo[ 1,2-a] [ 1,2]dtazepin-1 ( S)-karbonsav-hidrobromidot a következőképpen állítjuk elő: A) i) 0,566 g 9(S)-amino-oktahidro-10-oxo-6H-piridazo-[l,2-a] [1,2] diazepin-1 (S)-karbonsav-tercier butil-észter, 0,688 g 2(R,S)-bróm-4-(4-nitro-fenil)-butánsav-tercier butil-észter és 0,202 g trietil-amin 12 ml acetonitrillel képezett oldatát 80 °C-on 16 órán át melegítjük. Az oldószert eltávolítjuk és a maradékot víz és diklór-metán között megosztjuk. A szerves oldatot bepároljuk, a visszamaradó olajat szilikagélen kromatografáljuk és 1:1 arányú toluol (etil-acetát eleggyel eluáljuk. Előbb sárga olaj alakjában 0,195 g 9(S)-[l(R)-tercier butoxikarbonil-3-(4-nitro-fenil)propil-amino] -ok: ah idro-10-oxo-6H-piridazo[ 1,2-a][l,2] diazepin-l(S) -karbonsav-tercier butil-észtert, majd ugyancsak sárga olaj alakjában 0,252 g 9(S)[ 1 (S) tercier butoxikarbonil 3-(4-nitro-feni!)-propilamino]-oktahidro-10-oxo-6H-piridazo [ 1,2-a] [ 1,2]dia-5 10 15 20 25 3C 35 40 45 50 55 60 65 4
