198293. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált piperazinil-1,4-naftalin-dion származékok és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 vizsgált vegyületekre kapott eredményeket a kontroll százalékában adjuk meg, a következő egyenlet szerint: Hísztamin felszabadulás vizsgált wgyülettel (%) jqq Hiszlamin felszabadulás a kontroliban (%) A vizsgálandó vegyületek különböző koncentrációinál kapott értékekből kiszámítjuk az ED5o értéket (vagyis azt a koncentrációt pmól/l-ben kifejezve, amely 50%-os gátlást okoz a hisztamin-felszabadulásban) lineáris regresszióval. Azokat a vegyületeket tekintjük hatásosnak, amelyek ED50 értéke < 0,48 pmólfl. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek néhány képviselőjével kapott eredményeket az 1. táblázatban ismertetjük. 1. táblázat Hisztamin-felszabadulás gátlása immunológiailag stimulált bazofil sejtekből Vegyidet neve ED50 (jumól/1) 4-(3-klór-l,4-dioxo-2-naftil)-piperazin -1 -karbonsav-etil-észter 5,5 2klór-3-jmetil[2-(metilbenzil-amino)-etilj-amino} naftalin-1,4-dion-hídrogén-klorid 4,0 4-^[4-(3-klór-l ,4-dihidro-l 4-dloxo-2- -naftil)-l-piperazinil)-acetil]-morfolin 20,6 l-j[4-(3-klór-l ,4-dilüdro-l ,4-dioxo-2- -l-piperazinil]-acetil}-pirrolidin 14,9 2-kíór-3-[4-(2-piridil )-l-pipe razi nil)-naftalin-1,4-dion-hidrogén-klorid 4,6 24(2-(2-benzotiazolil-metil -amino)-etil]-metil -amincj -3-kl ór naftalin -1.4 -dión 6,4 2-[4-(2-benzotiazolil)-l-piperazinil]-3- -klór-naftalin-1,4-dion-hidrogén-klorid 5,4 4-(3-klór-l ,4-dihidro-l ,4-dioxo-2- -naftil>piperazin-l -karbonsav-etil-észter-hidrogén-kiőri d 1,5 2-klór-3-(3-metil-l-piperazinil)-naftalin-1,4-dión 3,0 4-(3-klór-l ,4-dihidro-l ,4-dioxo-2- -naftil)-piperazin-l -karbonsav-(2- -metil-propil)-észter 16,5 l-(2-klór-benzoil)4-(3-klór-l ,4- -dihidro-1,4-dioxo-2-naftil)-piperazin 1,8 A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek lípoxígenáz-gátló képességét a leukotrién B4 (LTB4) és az 5-hidroxi-ejkozatetraénsav (5-HETE) felszabadulásának és bioszintézisének gátlásának mérésével az alábbiak szerint határozzuk meg. Tengerimalacból származó 3 x 107 peritoneális neutrofil sejtet 37 °C-on inkubálunk 50 mmóyi Tris-puffert tartalmazó Dulbeco-pufferben (pH 7,4). öt perccel 100 /umól/1 arachidonsav és 20 ífmól/1- kaldum-ionofór (A23187) hozzáadása előtt a neutrofilekhez 10 /rg/ml koncentrációban vizsgálandó vegyületet vagy hordozóanyagot (kontroll) adunk. Az arachidonsav és a kaldum-ionofór hozzáadása után 3 perccel az elegy pH-értékét dtromsavval 3-ra állítjuk, majd azonos térfogatú metanol és kloroform hozzáadásával az össz-lipidet kloroformba edrah áljuk. Az 5-HETE-t és LTB4-et nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással elválasztjuk, 5 pmól/l-es, 4 x 25 cm-es oktadedl-szilikagél oszlopon (IBM lnsti uments), ecetsavval pH 3,0-ra állított 70-80 %-os vizes metanollal. A mozgó fázist 1,0 ml/percsebességgel szivattyúzva az LBT4-et és az 5-HETE-t a 270 illetve 236 nmen mért abszorpdó alapján dedektáljuk. Az LBT4 és 5 HETE mennyiségét a kontrollal összehasonlítva határozzuk meg, és az eredményeket a kontroll %-ában fejezzük ki. Minél alacsonyabb a %-os érték, annál hatásosabb a vizsgált vegyidet. A fenti vizsgálat eredményeit a 2. táblázatban ismertetjük. 2. táblázat Immunológiailag stimulált tengerimalac neutrofilekből származó neutrofil lipoxigenáz gátlása Vegyidet neve Mennyiség a kontroll %-ában LTB4 5 HETE 4-(3-klór-l ,4-dioxo-2-naftil)-piperazin-1 -karbonsan-etil-észter 0 0 2-klór 3-[4-(2-kinolinil)-l - -piperazinilj-naftalin-1,4-dion 0 0 4-(3-k)ór-l ,4-dihidro-l ,4-dioxo-2-n af til >-N ■( 2-klór-fe nil )-pi pe razin-1 -karboxamid 22,2 19,9 4-(3-klór-l ,4-dihidro-l ,4-dioxo-2-naftil)-N-(2-fluor-fenil)piperazin-1-karboxamid 0 2,0 2-[4-(l ,3-benzodioxoI-5-U-metiI)-1 -piperazinü]-3-klór naftalin-1,4-dion-hidrogén-klorid 0 0 4-(3-klór-l ,4-dihidro-l ,4-dioxo-2-(naftil)-N-[3H(trifluor-metil)-fenilj-piperazin-l -karboxamid 1 N-}.?-[4-(2-benzotiazolil)-l -piperazinil]-l ,4-dihidro-l ,4-dioxo-2-naftilj acetamid 0 0 4-(3-klor-l ,4-dihidro-l ,4-dioxo■2-riaftil)-N-(4-klór-fenil)-piperazin-l-karboxamid 1,4 2-klór-3-[4-(2-piridil)-l -piperazinil]-naftaiin-l ,4-dion-hidrogén-klorid 6,1 1,3 2-)j 2 -(2 -benzotiazolil-me til - -a minőbe tilj-metil-aminoJ-3- -klór-naftalin-1,4-dion 0 0,2 2-[4-(2-benzotiazolil )-hexahidro-1 H-l ,4-diazepin-l -il]-3-klór-naftalin-1,4-dion 1,1 2-klór-3-[4-(2-pirimidiI)-l -píperazinil]-naftalin-l ,4-dion-34,3 4-(l ,4-dihidro-3-metil-l ,4-dioxo-2-naftil)-piperazin-l -karbonsav-etil-észter 2,2 2-[4-(2-benzotiazolil)-l -piperazinil)-naftalin-l,4-dion 20,8 0,8 198.293 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
