198229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A/16686 antibiotikum komplex termelésének fokozására, valamint a komplexben egyes komponensek arányának szelektív növelésére
1 HU 198229 B 2 A találmány tárgya eljárás az A/16686 antibiotikum komplex valamint az A2 és/vagy A3 faktorban feldúsított A/16686 antibiotikum előállítására oly módon, hogy egy Actinoplanes sp. ATCC 33076 tenyészethez vagy annak valamely A/16686-ot termelő mutánsához hatásos mennyiségű, megfelelő prekurzort adunk. A szóbanforgó mikroorganizmus törzs morfológiai és fiziológiai jellemzőit a 188.684 számú magyar szabadalmunk leírásában megadtuk. Az A/16686 antibiotikum egy, az Actinoplanes sp. ATCC 33076 tenyészetből kinyert, depszipeptid (észter- és amid-kötéssel kapcsolódó oC-hidroxi- és oC-aminosavakból álló) anyag. Ennek az anyagnak - amely főként a Gram-pozitív baktériumokkal szemben hatásos - a leírása az előállítására szolgáló eljárás és a megfelelő gyógyszerkészítmények ismertetésével együtt megtalálható a 4,303,646 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban. A későbbiekben megállapították, hogy az A/16686 antibiotikumból három - egymáshoz nagyon hasonló - komponens különíthető el, ezeket elnevezték Ai, A2 illetve A3 faktornak. A legnagyobb mennyiségben kapott A2 faktor a legfontosabb a biológiai hatás szempontjából; az Ai és az A3 faktor kisebb mennyiségben képződik. Ezen anyagoknak, valamint előállításuknak és felhasználásuknak leírása megtalálható a 4,427,656 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban. Minthogy a mikroorganizmusok tűrő-, sőt, ellenállóképessége is egyre növekszik a jelenlegi antibiotikumos kezelésekkel szemben, még mindig nagy az igény új antibiotikumok előállítására. Különösen kívánatosak egyedileg izolált vagy komplex formában az olyan antibiotikumok, melyek nagyon jól meghatározott és állandó összetételűek. Tehát a találmány tárgya egyrészt eljárás az A/16686 antibiotikumban az A2 és/vagy az A3 faktorból képződő mennyiség szelektív növelésére. A cél vagy az egyedi komponensek kinyerése, vagy pedig az, hogy a komplexet a fenti komponensek egyikében vagy mindkettőjében feldúsítsuk. Az eljárás abból áll, hogy a fermentáció során az A/16686 előállítására szolgáló tenyészethez olyan prekurzort (elővegyületet) adunk, mely a kívánt faktor képződését előmozdítja. A találmány szerinti eljárással pl. egy ipari méretű fermentáció során megváltoztathatjuk az A/16686 antibiotikum fő komponenseinek arányát. Tehát ez a módszer felhasználható arra, hogy a végtermék összetételét az előírásoknak megfelelően állítsuk be. Továbbá a találmány szerinti eljárással a termelő tenyészet fermentációs masszájából közvetlenül kinyerhetünk egy olyan nyers terméket, mely igen gazdag az A/16686 antibiotikum Az faktorában, s ezt azután magasabb kitermeléssel és kevesebb időt igénylő lépésekben tiszta anyag formájában is izolálhatjuk. Az A/16686 antibiotikum komplexben az A2 faktor arányának növelésére szolgáló prekurzor lehet leucin vagy annak olyan savakkal vagy bázisokkal képzett sói, melyek a termelő mikroorganizmusokra nézve nem toxikusak, izovaleriánsav vagy annak olyan bázisokkal képzett sói, melyek a termelő mikroorganizmusokra nézve nem toxikusak, az izovaleriánsavnak kis szénatomszámú monovagy polihidroxí-alkanolokkal képzett észterei, alfa-keto-izokapronsav vagy annak olyan bázisokkal képzett sói, melyek a termelő mikroorganizmusokra nézve nem toxikusak, az alfa-keto-izokapronsavnak kis szénatomszámú mono- vagy polihidroxí-alkanolokkal képzett észterei, továbbá izoamil-alkohol vagy annak olyan savakkal képzett észterei, melyek a termelő mikroorganizmusokra nézve nem toxikusak. Az A/16686 antibiotikum komplexben az A3 faktor arányának növelésére szolgáló prekurzor lehet valin vagy annak olyan savakkal és bázisokkal képzett sói, melyek a termelő mikroorganizmusokra nézve nem toxikusak, alfa-keto-izovaleriánsav vagy annak olyan bázisokkal képzett sói, melyek a termelő mikroorganizmusokra nézve nem toxikusak, az alfa-keto-izovaleriánsavnak kis szénatomszámú mono- vagy poli-hidroxi-alkanolokkal képzett észterei, izovajsav vagy annak olyan bázisokkal képzett sói, melyek a termelő mikroorganizmusokra nézve nem toxikusak, az izovajsavnak kis szénatomszámú mono- vagy polihidroxí-alkanolokkal képzett észterei, továbbá izobutanol vagy annak olyan savakkal képzett észterei, melyek a termelő mikroorganizmusokra nézve nem toxikusak. A mikroorganizmusokra nézve nem toxikus bázisokkal képzett sók azok, melyek olyan típusú és koncentrációjú kationt tartalmaznak, hogy az a fermentációs masszában alkalmazott koncentrációban sem a mikoorganizmus-tenyészet növekedését, sem pedig a kivánt antibiotikum termelését nem csökkenti számottevő mértékben. Ilyen kationok pl. az ammóniumion, továbbá azok, amelyek alkálifémekből és alkálifőldfémekből (mint pl. nátrium, kálium, kalcium, magnézium) vagy aminokból, pl. 1-4 szénatomszámú primer, szekunder vagy tercier alkil-amino-csoportból vagy 1-4 szénatomszámú hidroxi-amino-alkil-csoportból képződnek. Előnyösen alkalmazhatók a nátrium-, kálium- vagy ammóniumionokat tartalmazó sók. A mikroorganizmusokra nézve nem toxikus savak - tehát azok a savak, melyek a fermentációs masszában alkalmazott koncentrációban sem a mikroorganizmus-tenyészet növekedését, sem pedig a kívánt antibiotikum termelését nem gátolják számottevő mérték5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
