198130. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán szérum albumin alapú, izotópdiagnosztikai célokra alkalmas hordozófehérjék előállítására

1

HU 198130 B

2

rensen-oldatot), 0,1 N vizes sósavoldattal készített őn(II)-klorid oldatot és glükózt adunk, hogy az elegy 1 mg/ml humán szérum albumint, 2 fig/ml ón(II)kloridot és IS mg/ml glükózt tartalmazzon, és pH-ja 7,2 legyen. Az így kapott oldatot 1-2 perc alatt 96 *C-ra melegítjük fel, és 2 percig ezen a hőmérsékleten keverjük. Ezután az aggregált oldatot szobahőmérsékletre hűtjük, 0,22 pm pórusátmérőjű Millipore szűrőn keresztül szűrjük, és a szűrletet 1 ml-es részletekben porampullákba töltve az 1. példában leírt módon fagyasztva szárítjuk.

A preparátum elektronmikroszkópos vizsgálata szerint a szemcsék átmérője nem haladja meg a 100 nm-t; a részecskék 90%-ának átmérője 10 és 80 nm közötti érték. A preparátum "mTc-mal jelezhető; a jelzési hatásfok 95%-nál nagyobb. A "mTc-mal jelzett preparátum eloszlását patkány szerveiben a IV. és V. táblázatban közöljük.

IV. táblázat

Szerv

I. v. dózis %-a (±SD) az

adott szervben

30 perc

1 óra

2 óra

4 óra

24 óra

elteltével

Vér

1,02

0,56

0,59

0,39

0,32

(0,95)

(0,06)

(0,17)

(0,09)

(0,09)

Izom

0,96

1.47

2,69

0,99

0,97

(0,41)

(0.24)

(0,35)

(0,19)

(0,11)

Csont+

10,37

9,22

10,6

8,03

7,09

velő

(0,99)

(0,54)

(2,83)

(2,25)

(2,3)

Tüdő

0,28

0,19

0,13

0,09

0,09

(0,02)

(0.03)

(0,06)

(0,03)

(0,04)

Máj

65,86

68,1

66,3

59,16

46,59

(4,18)

(7,58)

(11,51)

(3,82)

(4,71)

Lép

1,52

1,35

1,78

1,32

1,57

(0,10)

(0,37)

(0,36)

(0.04)

(0,76)

Vesék

1,00

1,77

3,82

4,89

7,08

(0,42)

(0,10)

(1,56)

(0,40)

(1,01)

Gyomor

1.27

0,25

0,17

0,41

0,12

(1.74)

(0,15)

(0,07)

(0,43)

(0,14)

Bél

0,49

0,72

1,45

2,53

0,78

(0,37)

(0,16)

(0,64)

(1,16)

(0,23)

V. táblázat

Szerv

S. c. dózis %-a

az adott szerben (±SD)

30 perc

3 óra

24 óra

elteltével

Vér

0,13

0,27

0,34

(0,09)

(0,06)

(0,04)

Izom

0,34

0,56

0,53

(0,18)

(0,21)

(0,36)

Csont+velő

1,03

1,45

2,11

(0,28)

(0,03)

(0,56)

Tüdő

0,057

0,054

0,06

(0,04)

(0,02)

(0,01)

Máj

7,34

11,37

14,46

(0,13)

(1,05)

(2,55)

Szerv S. c. dózis %-a az adott szerben (±SD)

30 perc 3 óra 24 óra elteltével

Lép

0,17

0,50

0,42

(0,01)

(0,32)

(0.07)

Vesék

0,18

1,47

7,92

(0,05)

(0,03)

(0,56)

Gyomor

1,35

0,85

0,06

(1,46)

(0,27)

(0,01)

Bél

1,3

6,94

0,43

(0,00)

(1,33)

(0,15)

Patkányokon végzett szcintigráfiás vizsgálatok során megállapítottuk, hogy a szubkután injekcióban beadott, "mTc-mal jelzett preparátum beadását követően 3 óra elteltével a nyirokcsomók az aktivitásfelvételek alapján jól megítélhetők.

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás humán szérum albumin alapú, izotópdiagnosztikai célokra alkalmas hordozófehérje-preparátumok előállítására, azzal jellemezve, hogy humán szérum albuminból fiziológiás sóoldattal készített, 2-10 tömeg%-os oldathoz -5 *C és +4 *C közötti hőmérsékleten 0,05-0,15 térfogatrész 96%-os etanolt adunk, az elegyet hűtjük, keverjük, majd centrifugálással eltávolítjuk az alkohollal kicsapható komponenseket, a felülúszót elkülönítjük, kívánt esetben vízzel és/vagy fiziológiás sóoldattal hígítjuk, ezután az oldathoz fiziológiailag alkalmazható ón(ll)-só vízzel vagy fiziológiás sóoldattal készített oldatát adjuk olyan mennyiségben, hogy a kapott oldat 100 mg fehérjére vonatkoztatva 0,1-2 mg Sn(II)-t tartalmazzon, a kapott oldat pH-ját 2,9 és 3,1 közötti értékre állítjuk be, majd az elegyet szűrjük, és az így kapott szűrletet

(a) fagyaszva szárítjuk; és/vagy

(b) 5,2 és 5,4 közötti pH-értékre állítjuk, -5 °C és +4 ‘C közötti hőmérsékletre hűtjük, ezután 0,8-1.1 'C/perc sebességgel 20±1 °C-ra melegítjük, 30±5 percig ezen a hőmérsékleten állni hagyjuk, ezután 6±1 *C/perc sebességgel 80±1 'C-ra melegítjük, 5 percig ezen a hőmérsékleten keverjük, végül a fűtést megszűntetjük, és a lehűlt oldatot fagyasztva szárítjuk; vagy

(c) 5,9 és 6,1 közötti pH-értékre állítjuk, -5 'C és +4 *C közötti hőmérsékletre hűtjük, ezután 0,8-1.1 0C/perc sebességgel 20±1 °C-ra melegítjük, 30as5 percig ezen a hőmérsékleten állni hagyjuk, ezután 7ael 'C/perc sebességgel 91 'C-ra melegítjük, 10 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk, végül a fűtést megszűntetjük, és a lehűlt oldatot fagyasztva szárítjuk; vagy

(d) 7,1 és 7,3 közötti pH-értékre állítjuk, 1-2 perc alatt 96 'C- ra fűtjük fel, 2 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk, ezután a fűtést megszűntetjük, és a lehűlt oldatot fagyasztva szárítjuk.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy fiziológiailag alkalmazható ón(U)-sóként ón(II)-kloridot, - tartarátot, -citrátot vagy -fluoridot, előnyösen ón(D)-kloridot használunk.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

5