198130. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán szérum albumin alapú, izotópdiagnosztikai célokra alkalmas hordozófehérjék előállítására
1 HU 198130 B 2 A találmány tárgya eljárás négy, egymástól eltérő humán izotópdiagnosztikai célra alkalmas hordozófehérje preparátum előállítására humán szérum albuminból. Ismeretes, hogy a radioaktív izotópokkal jelzett hordozófehéijéket - például a "mTc-mal jelzett humán szérum albumint - tartalmazó diagnosztikai készítmények jól alkalmazhatók a humán izotópdiagnosztikában a betegségek korai kimutatására, illetve a terápia eredményeinek noninvasiv követésére. Ismert az is, hogy ezekben a készítményekben a hordozófehérje az az izotópdiagnosztikai komponens, ami a jelzőanyagot (radioaktív izotópot) szelektíven a célzott szervbe szállítja [S. L. Yang és munkatársai: J. Nucl. Med. 19, 804 (1978)]. Eltérő szervek izotópdiagnosztikai vizsgálatához következésképpen eltérő minőségű hordozófehérjékre van szükség. A 2 314 059 sz. német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi leírás a tüdő izotópdiagnosztikai vizsgálatához felhasználható hordozófehérje előállítását ismerteti. Az ott közöltek szerint humán szérum albumint benzil-alkoholos előkezeléssel tisztítanak, majd savas pH-értéken 85 °C-on hőkezelik, a kapott aggregátumot elkülönítik, egy újabb hőkezelési lépésnek vetik alá, acetát-pufferoldatban 24 órán át 100 mg fehérjére vonatkoztatva 3 mg ón(II)-ionnak megfelelő mennyiségű ón(II)-kloriddal reagáltatják, a kapott terméket többszöri mosással tisztítják, végül benzil-alkoholt is tartalmazó acetát-pufferoldatban tárolják. A készítmény 4 *C-on körülbelül 60 napig tárolható változás nékül. Lefagyasztott állapotban a készítmény hosszabb időn át (körülbelül 4 hónapon keresztül) is eltartahatő, ez az intézkedés azonban nem előnyös, mert a készítmény felengedésekor az aggregátum szemcsséi összetapadhatnak, és az így képződő durvább szemcsés anyag a tüdő vizsgálatára már nem alkalmas. A 2 536 008 sz. német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi leírás ugyancsak a tüdő izotópdiagnosztikai vizsgálatához felhasználható hordozófehérje előállitásával foglalkozik. Az ott ismertetett eljárás szerint a humán szérum albumint adott esetben dialízissel tisztíják, majd 9,8-10,2 pH-értékű vizes oldatban 71—73 *C-on tartják 20 percig, a szuszpenziót 45- 50 ’C-ra hűtik, a pH-t 6,8-7,0-ra állítják, a szuszpenzióhoz a jelenlévő humán szérum albumin tömegére vonatkoztatva 0,17-0,22 tömeg %-nak megfelelő mennyiségű ón(II)-iont tartalmazó ónsót adnak, a pH-t 4,8-5,2 értékre csökkentik, a szuszpenzióhoz a humán szérum albumin tömegére vonatkoztatva további 1,53-1,73 tömeg%-nak megfelelő mennyiségű ón(II)-iont tartalmazó ónsót adnak, a szuszpenziót 71—73 *C-on ismét hőkezelik, ezután a szilárd részecskéket elkülönítik, tisztítják, végül fagyasztva szárítják. Máj és lép izotópdiagnosztikai vizsgálatához felhasználható hordozófehérje előállítását ismerteti a 4 187 285 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás. Az eljárás során humán szérum albumint híg vizes savoldattal, ón(II)-só vizes oldatával és pufferoldattal keverik össze, a keveréket 75-85 *C-on hőkezelik, ezután a szilárd részt a pufferoldat eltávolítása céljából többszöri mosással tisztítják, végül ultrahangos kezeléssel aprítják. 1 tömegrész humán szérum albuminra vonatkoztatva 0,05-0,2 tömegrész (tehát 5-20 tömeg%) ón(II)-ionnak megfelelő mennyiségű ónsót használnak fel. Az ismertetett eljárások mindegyike csak egy-egy meghatározott típusú célzott izotópdiagnosztikai vizsgálat elvégzésére alkalmas hordozófehérje előállítását teszi lehetővé. Az ismert eljárások közös hátránya, hogy bonyolultak és hosszadalmasak. További igen komoly hátrány, hogy az ismert eljárások csak nagy ón(II)-tartalmú preparátumok előállítását teszik lehetővé. A 4 187 285 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerinti eljárás kiugróan nagy - a humán szérum albumin tömegére vonatkoztatva 5- 20 tömeg% - ón(ü)-iont tartalmazó terméket szolgáltat; a 2 314 059 sz. német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi leírásban közöltek szerint előállított termék ón(II)-ion tartalma a humán szérum albumin tömegére vonatkoztatva 3 tömeg% körüli érték; és még a 2 536 008 sz. német szövetségi kőztársaságbeli szabadalmi leírás szerinti módszerrel, amelynek célja igen kis ón(II)- tartalmú termék előállítása, is csak 1,70-1,95 tömeg% ón(II)-iont tartalmazó terméket lehet előállítani. Tekintettel arra, hogy az ón(II)-sók citotoxikusak, és az 6n(II)-ionok fölöslege meghamisítja az izotópdiagnosztikai vizsgálat eredményeit, változatlanul szükség van az ón(II)sók mennyiségének csökkentésére az izotópdiagnosztikai preparátumokban. Felismertük, hogy egy és ugyanazon alapanyagból - humán szérum albuminból - kiindulva a kezelés pH-jának és hőmérsékletének megfelelő változtatásával egyszerű eljárással alakíthatunk ki négy különböző izotópdiagnosztikai humán szérum albumin preparátumot, amelyek négy különböző típusú célzott izotópdiagnosztikai vizsgálat elvégzésére alkalmasak. A találmány szerinti eljárás egyben lehetőséget ad a preparátum ón(II)-ion tartalmának igen jelentős csökkentésére. A találmány értelmében a következőképpen járunk el: Humán szérum albuminból fiziológiás sóoldattal készített, 2-10 tömeg%-os oldathoz -5 *C és +4 'C közötti hőmérsékleten 0,05-0,15 térfogatrész 96%-os etanolt adunk, az elegyet hűtjük, keverjük, majd centrifugálással eltávolítjuk az alkohollal kicsapható komponenseket, a felülúszót elkülönítjük, kívánt esetben vízzel és/vagy fiziológiás sóoldattal hígítjuk, ezután az oldathoz fiziológiailag alkalmazható ón(II)só (klorid, tartarát, citrát vagy fluorid) vízzel vagy fiziológiás sóoldattal készített oldatát adjuk olyan mennyiségben, hogy a kapott oldat 100 mg fehérjére vonatkoztatva 0,1-2 mg Sn(II)-t tartalmazzon, a kapott oldat pH-ját 2,9 és 3,1 közötti értékre állítjuk be, majd az elegyet szűrjük, és az így kapott szűrletet (a) fagyasztva szárítjuk; és/vagy (b) 5,2 és 5,4 közötti pH-értékre állítjuk, -5 'C és +4 *C közötti hőmérsékletre hűtjük, ezután 0,8- 1,1 'C/perc sebességgel 20±1 "C-ra melegítjük, 30±5 percig ezen a hőmérsékleten állni hagyjuk, ezután 6±1 'C/perc sebességgel 80±1 'C-ra melegítjük, 5 percig ezen a hőmérsékleten keverjük, ezután a fűtést megszüntetjük, és a lehűlt oldatot fagyasztva szárítjuk; vagy (c) 5,9 és 6,1 közötti pH-értékre állítjuk, -5 ’C és +4'C közötti hőmérsékletre hűtjük, ezután 0,8-1,1 'C/perc sebességgel 20+1 ‘C-ra melegítjük, 3Q±5 percig ezen a hőmérsékleten állni hagyjuk, ezután 7±1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
