198126. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hatóanyagként 1,1-bisz-(1,2,4-triazol-1-il-metil)-2-(2,4-diklór-fenil) etanolt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
A találmány tárgya eljárás hatóanyagként 1,1-bisz(l^^-triazol-l-il-metil^-^^-diklór-feniO-etanolt vagy gyógyászatiig alkalmazható savaddíciős sóit tartalmazó, aromatáz-inhibitor hatással rendelkező humán- vagy állatgyógyászati készítmények előáilítására. Ismert, hogy az aromatáz enzim az élő szervezetekben különböző szteroid-hórmonok A gyűrűjének aromatizálódását katalizálja. Ismert az is, hogy a rák egyes típusainak (így például az emlőráknak) a kialakulásában jelentős szerepe van az aromás A gyűrűt tartalmazó szteroid-hormonoknak. Az ilyen típusú rákok az aromás A gyűrűt tartalmazó szteroid-hormonok forrásának eltávolításával — például petefészek- és mellékvese-eltávolítással — gyógyíthatók. A gyógyítás azonban műtéti út nélkül is lehetséges, ha az élő szervezetbe a szteroidok A gyűrűjének aromatizálódását gátló anyagokat juttatunk. Azt tapasztaltuk, hogy az l,l-bisz(l,2,4-triazol-l-il-metil)- 2-(2,4-diklór-fenil)-etanol, illetve a vegyület gyógyászatiig alkalmazható savaddíciős sói erre a gyógyászati célra alkalmasak. A 44 605 sz. európai szabadalmi leírás (I) általános képletű triazol- és imidazol-származékokat ismertet — a képletben R1 adott esetben szubsztituált alkil-, cikloalkil-, aril- vagy aralkilcsoportot és Y1 és Y2 = CH- vagy = N- csoportot jelent. Az itt ismertetett vegyületek közé tartozik a (Ú) képletű l,l-bisz(l,2,4- triazol-l-il-metil)-2-(2,4-diklór-fenil)-etanol is, ami olyan (I) általános képletű vegyületnek felel meg, amelyben Y1 és Y2 egyaránt =N- csoportot, míg R1 2,4-diklór-benzol-csoportct képvisel. A 44 605 sz. európai szabadalmi leírás az (I) általános képletű vegyületeknek fungicid és növényi növekedést szabályozó hatást tulajdonít, és semmiféle utalást nem tartalmaz arra vonatkozólag, hogy a vegyületek aromatáz-inhibitor hatással vagy esetleg valamilyen más, humán- vagy állatgyógyászatban hasznosítható biológiai aktivitással is rendelkeznének. Kísérleteink során meglepő módon azt tapasztaltuk, hogy a (II) képletű vegyület és gyógyászatiig alkalmazható savaddíciős sói erős aromatáz-inhibitor hatást fejtenek ki, ennek megfelelően a humán- és állatgyógyászatban rákellenes készítmények hatóanyagaiként alkalmazhatók. A találmány tárgya tehát eljárás aromatáz-inhibitor hatással rendelkező humán- vagy állatgyógyászati készítmények előállítására oly módon, hogy az ismert módon előállított l,l-bisz(l,2,4-triazol-l-il-metil)-2- (2,4-diklór-fenil)-etanolt vagy valamely gyógyászatiig alkalmazható savaddíciős sóját mint hatóanyagot a szokásos gyógyszerészeti hordozó-, hígító- és/vagy egyéb segédanyagok felhasználásával, ismert gyógyszertechnológiai műveletekkel humán- vagy állatgyógyászati készítményekké alakítjuk. A (U) képletű l,l-bisz(l,2,4-triazol-l-il-metil)-2- (2,4-diklór-fenil)-etanolt önmagukban ismert módszerekkel állíthatjuk elő. Eljárhatunk például úgy, hogy a (III) képletű epoxidot - amit adott esetben magában a reakcióelegyben alakítunk ki — (IV) képletű triazollal vagy annak alkálifémsójával reagáltatjuk, vagy az (V), (VI) vagy (VII) általános képletű halogénvegyületeket - a képletekben Z halogén-2 atomot jelent - (IV) képletű triazollal vagy annak alkálifémsójával reagáltatjuk. Kívánt esetben a bázis formájában kapott terméket ismert módon gyógyászatiig alkalmazható savaddíciós sóivá, például a megfelelő hidrogén-halogeniddé, szulfáttá, acetáttá, p-toluol-szulfonáttá vagy tartaráttá alakíthatjuk, illetve a só formájában kapott termékekből ismert módon felszabadíthatjuk a (II) képletű vegyületet. A (II) képletű vegyületet vagy annak gyógyászatiig alkalmazható savaddíciős sóit tartalmazó humánvagy állatgyógyászati készítmények például orálisan vagy parcntcrúlisun adagolható gyógyszerformák, így tabletták, kapszulák, emulziók, vagy vizes vagy olajos oldatok vagy szuszpenziók lehetnek. Különösen előnyösek a dózisegységenként 1—100 mg, célszerűen 5-50 mg hatóanyagot tartalmazó tabletták vagy kapszulák. A (II) képletű vegyület aromatáz-inhibitor hatását a következő farmakológiai módszerekkel vizsgáltuk: A) In vitro körülmények között végzett vizsgálatok: Az aromatáz-inhibitor aktivitás vizsgálatához emberi placenta mikroszomális frakciójában lévő enzimet használtunk [lásd Ryan: J. Bioi. Chcm. 234, 268 (1959)]. Az enzim aktivitásának meghatározása során a 0,5 mikromólos (10,2/J-3H)-tesztoszteron-oldatból 20 percig 37 °C-on végzett inkubálás után felszabadult, triciummal jelzett víz mennyiségét mértük. A módszer lényegében megegyezik Thomson és Siiteri mérési módszerével [J. Bioi. Chem. 249, 5364 (1974)], azzal a különbséggel, hogy ebben az esetben a vizsgálathoz androsztén-dion helyett tesztcszteront használtunk. A vizsgálandó vegyületből 2, 0,2 és 0,02 /tg'ml koncentrációjú dimetil-szulfoxidos oldatokat készítettünk; 50 /ti oldathoz, amely szubsztrátumot (tesztoszteront), kofaktorokat (NADPH glükóz-6- foszfátot és glükóz-6-foszfát-dchidrogenázt) és a hatóanyag dlmctll-szulfoxidos oldatát (az összehasonlító vizsgálatban csak dimetil-szulfoxidot) tartalmazta, 50 /d mikroszóma-szuszpenziót adtunk, majd az inkubációs idő leteltével a reakciót 200 /ti 5 tömeg(térfoga t %-os csontszén-szuszpenzió (szu szpen dálószei: 0,5 tömcg/térfogat%-os vizes Dextrán T70 oldat) beadagolásával leállítottuk. 1 óra elteltével a csontszenet centrifugálással eltávolítottuk, a felülúszóból 150 /ti térfogatú mintát vettünk, és folyadékszcintillációs számlálóval meghatároztuk a triciummal jelzett víz mennyiségét. Az enzimgátló hatást a következő képlettel számítottuk ki: %-OS gátlás = hatóanyag jelenlétében mért ért_ékx {QQ hatóanyag távollétében mért érték Ebben a vizsgálatban az 1,1 -bisz(1,2,4-triazol-1 -ilmetil)-2-(2,4-diklór-fenil)-etanol 0,2 /ig/ml dózisban 50%-os gátló hatást fejtett ki. •B) In vivo körülmények között végzett vizsgálatok: Ebben a kísérletben a nőstény patkányok ovulációjának gátlását vizsgáltuk. Ellenőrzött megvilágítású (6 óra és 20 óra között megvilágított) ketrecekben tartott nőstény patkányok hüvelyéből naponta kenetet vettünk, és a kísérletbe azokat az állatokat 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
