198091. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gangliczidszármazékok és az azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
11 198 091 12 (v) A 200 ml koncentrált gnngliozidoldat pl í ját 6 a sósavoldat túl 2,6-ra állítjuk. A kapott oldatot 100 liter újradesztillált vízzel szemben dializáljuk, mágneses keverés mellett, 4 °C-on, 4,5 cm átmérőjű és 160 cm hosszú Visking-csőben A kapott oldatot hagyományos fagyasztva szárító berendezésben liofilizáljtik. 19,2 g acetonnái szárított porból 95—100 mg terméket kapunk. A termék fizikai jellemzőit a leírás első részében ismertettük. 2. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, a (iv) lépés végéig. Ezután a 200 ml koncentrált gangliozidoldat pH-ját 6 n sósavoldattal pH 2,6-ra állítjuk. A kapott oldatot vizes sósavoldattal (pH 2,6) szemben dializáljuk, Amicon membrán-rendszert (5000 molekulatömegű U5UM05 membrán, 62 mm átmérő) használva, míg az elfolyó oldat pH-ja 2,6 lesz (ez közel 18 óra múlva következik be). A savas oldatot desztillált vízzel szemben dializáljuk, az 1. példában ismertettek szerint Visking-csőben, és a kapott oldatot a szokásos fagyasztva szárító berendezésben liofilizáljuk. A termék fizikai jellemzőit a leírás elején ismertettük. A találmány szerinti eljárással előállított gangliozid-származékok biológiai hatását az alábbiakban ismertetjük. 1) Klebsiella pneumoniae elleni hatás 20±1 g tömegű svájci albino hím egereket (Charles River CDI) véletlenszerű elrendezésben két 20 állatból álló csoportra osztunk. Az állatoknak intraperitoneálisan 0,25 ml/10 g egér dózisban 24 órás Klebsiella pneumoniae CN 3632 folyékony tenyészetet injektálunk, amelyet úgy állítottunk elő, hogy a baktériumot 24 órán át szív-agy táptalajban (Difco) tenyésztettük, majd a tenyészetet centrifugáltuk, sóoldattal mostuk, és sóoldatban 2X107 sejt/ml koncentrációban újraszuszpendáltuk. Az egyik, 20 állatból álló csoportot előzőleg 2,5 mg/kg dózisban 2. példa szerint előállított GM1P gaiiglioziddal kezeljük intravénásán, a K. pneumoniae fertőzés előtt 24 órával. A fertőzés utáni 8. napon kapott eredmények az alábbiak: 2 Pusztulás Csoport elhullás %-os pusztulás Kontroll 16/20 80 GMiP ganglioziddal kezelt' 0/20 0 2) Herpes HSV—1 (F törzs) elleni hatás 16 g-os BALB/c egereket véletlenszerű eloszlásban három, csoportonként 6 állatból álló csoportra osztunk. Az egereket intraperitoneálisan 2,5X1010 pfu/ml (12X LD50) dózisban HSV—1 vírussal (F törzs) injektáljuk, a vírust Dr. B. Roizman (University of Chicago) bocsátotta rendelkezésünkre. Két csoportot 0,6 mg/kg, i'letve 3 mg/kg dózisban a 2. példa szerint előállított C mjP gaiiglioziddal kezelünk, intraperitoneálisan, naponta kétszer, a fertőzést megelőző 48. órától kezdve a fertőzés utáni 7. napig. A kontrollként használt Harmadik csoportnak azonos térfogatban, azonos idíbcn oldószert injektálunk. Az alábbi eredményeket lopjuk: Egyes állatok Csoport túlélési ideje (óra) Átlagos túlélési idő (óra) Élű állatok száma a 7. napon 1. 12,12,12,24, 24,26 20 0/6 2. 180,192,288, 288,288 254 4/6 3. 180,192,288, 288,288,288 254 4/6 1. csoport: kontroll, 2. csoport: 0,6 mg/kg GMiP gaiiglioziddal kezelt, 3. csoport: 3,0 mg/kg GmiP gaiiglioziddal kezelt. 3) Plasmodium berghei protozoon elleni hatás 40 db, 22t i g tömegű svájci hím albino egeret (Charles River CDI) véletlenszerűen 10 állatból álló csoportokra osztunk. Az állatokat intraperitoneálisan fertőzzük 6 napos parazitát hordozó citrátos egérvérrel, amelyet előzőleg sóoldattal 1 :1000-re hígítva 1,58X106 P. berghei I.S.S./ml koncentrációra állítottunk. Az 1. csoportot sóoldattal injektáljuk, a 2. csoportot s.c. 5 mg/kg dózisban sóoldatban oldott 1. példa szerint előállított GmiP ganglioziddal, a 3. csoportot 1 mg/kg dózisban s.c. 0,25 vegyes%-os vizes CMC-oldatban oldott primetaminnal (ismert antiprotozoális szer), és a 4. csoportot a fenti dózisban GmiP-vcI és primetaminnal kezeljük. A dózistérfognt 0,25 ml/10g. A GMiP-t a fertőzés (0. nap) előtt 24 és 2 órával adjuk, a prímetamint a 0., 1. és 2. napon. Az eredmények az alábbiak: Csoport 9. nap %-os pusztulás 13. nap 1. 100 (100) 2. 90 100 3. 50 90 4. 20 80 A fenti eredményekből látható, hogy a GmiP protozoon-ellenes hatással rendelkezik, és növeli az ismert protozoo-ellenes szer hatását is. 4) Candida albicans elleni hatás 53 db, 23 ±1 g tömegű svájci hím albino egeret (Charles River CDI) véletlenszerűen négy, egyenként 10, 14, 14 és 15 állatból álló csoportra osztunk. Az 1. csoportot kontrollként sóoldattal injektáljuk; a 2. csoportnak a fertőzés előtt. 96 órával intravéná-7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
