198088. lajstromszámú szabadalom • Eljárás leukémiás sejtek szaporodását gátló, immunstimuláló hatású peptidek, az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
11 198 088 12 (01Bií>-NH2 szabad dipcptid-amidot 15 ml dimctilformamidban oldjuk. Eközben oldatot készítünk 1,80 g (5,5 mmól) Z-Arg(HCl)-OH • H20-ból 15 ml dimetil-formamiddal. Az oldathoz 0,77 ml (5,5 mmól) trictil-amint adunk, majd lehűtjük -10 T-ra. Ezen a hűmérséklétén az elegyhez csepegtetünk 0,71 ml (5,5 mmól) klór-szénsav-i-butil-észtert. A kapott vegyes anhidridoldatoí még 10 percig ezen a hőmérsékleten keverjük, majd ezen a hőmérsékleten hozzáadjuk a fentiek szerint előállított dimetil-formamidos szabad dipeptid-amid-oldatot. A reakcióelcgyet egy éjszakán át keverjük szobahőmérsékleten, majd vákuumban bepároljuk. A maradék olajat 100 ml kloroform és 10 mi n-butanol elegyében feloldjuk, az oldatot háromszor 5 %-os ecetsav-oldattal és háromszor 5 %-os nátriumlűdrogén-karbonát-oldattal mossuk, vízmentes r,át- 5 rium-szulfáttal megszorítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradék olajat 10 ml clil-acctátban oldjuk, és az oldat zavarosodásáig étert adunk hozzá. A kapott szuszpenziót hűtőszekrényben állni hagyjuk, majd szűrjük, a csapadékot szárítjuk. így 1,94 g (53,7%) 10 cím szerinti terméket kapunk. Op.: 86-88 °C. [«Jy = -15,8° (c = 1, dimetil-formamidban). R,- = 0,30. Az 1. és 2. példában megadottak szerint állítjuk elő a következő peptid-származékokat is: Név Példa Kitermelés l%] Olvadáspont °C Rf Tisztítás Z-G!n-Lys(Z)-NH2 1. 72 209-212 0.43 (3) EtOH Z -Gin-Giu (O Bzl)-Ly s (Z) -NH 2 1. 53 ISO (b) 0,65 (4) MeOH Boc-Arg(HCI)-LysíBoc)-Glu(OtBu)-NH2 2. 54 86-88 0.30 (3) EtOAc-éter boc-Aig(HCi)-Lys(Boc)-Glu(OtBü)-OtBi! 2. 28 amorf 0.70 (4) ősz!, kr. boc-Arg(HCl)-Lys(Boc)-Gln-OtBu 2, 27 amorf 0,40 (4) őszi. kr. Boc-Leu-Val-AiaONB í. 85 ISO-182 0,90 (2) EtOAc-hex. Z-Arg(Z2)-Orn(Z)-Asp(OBzl)Val-Nií2 í. 7ü 183-190 0.70 (2) EtOH Z-Arg{HCI)-Orn(Z)-Asp(üözl)-Val-OUz! í. 38 138-141 0,40 (4) őszi. kr. Z-Ly s(Z )-Glu(Oßzl )-Lys(Z)-Lys(Z)-ON B í. 62 140-142 0,70(1) EtOAc Z-Lys(Z)-Leu-Lys(Z)-Lys(Z)-ONB í. 72 137-139 0,70(1) EtOAc Z-Lys(Z)-Asp(OBzl)-Leu-Lys(Z)-ONB í. 58 178-180 0,80(1) EtOAc Boc-Glu(OBzl)-Leu-Val-Ala-ONB i. 79 amorf 0.85 (2) petr. ct. Z-Lcu-Pro-Ala-Giy-ONB í. 62 olaj 0,90 (2)-Az alkalmazott rövidítések: Rf = Rf érték, zárójelben a futtatóelegy száma, tisztítás = a tisztítás módja. Ezen belül: EtOH = etanol; MeOH = metanol; EtOAc = etil-acetát; éter - dieul-éter; hex. = n-hexán; petr. ét. = petroléter; őszi. kr. = oszlopkroinatográfia. 3. példa Lys-Glu -Lys-Lys-diacetát 1,7 g (1,3 mmól) Z-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Lys(Z)Lys(Z)-ONB védett tetrapeptid-észtert (1. példa) feloldunk 30 ml 90%-os eceísav-oldatban, az oldathoz hozzáadunk 1,0 g 5 %-os csontszenes palládium katalizátort, és 6 órán keresztül hidrogént buborékoltatunk át a szuszpenzión. Ezután a katalizátort kiszűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékhoz 20 ml vizet adunk, majd bepároljuk, ezután 20 ml etanoit adunk a maradékhoz, és újból bepároljuk. így először az ecetsav, majd a víz maradékát távolítjuk cl. A kapott maradékot 20 ml 2 :3 arányú etanol :éler eleggyel megszilárdítjuk, a kapott szuszpenziót szűrjük, a csapadékot a fenti eleggyel kétszer mossuk, majd foszfor-pentoxid felett exszikkátortan vákuumban megszorítjuk. így 0,75 g (88%) cím szerinti vegyületet kapunk. Aminosav analízis: Lys = = 2,95(3,0), Glu= 1,00(1,0). [a]p° = —17,3° (c = 1, 10%-os ecctsav-oldatban). 45 R® - 0,17. 4. példa 50 Arg-Lys-Glu-NII2 -acélát 1,47 g (2,0 mmól) Boc-Arg(IICl)-Lys(Boc)-Glugg (0‘Bu)-NH2 védett tripeptid-amidot 15 ml trifluorecetsavban feloldunk. Az oldatot 1,5 órán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten, majd 150 ml vízmentes éterrel hígítjuk. A kapott szuszpenziót szűrjük, a csapadékot 50 ml vízben oldjuk, és az. oldatot 50 ml 0Q acetát ciklusban lévő DOWEX 2X8 anioncserélő gyantával kezeljük. 15 perc után a szuszpenziót szűrjük, a szűrletet csontszénnel derítjük, újra szűrjük, majd liofilizáljuk. így 0,93 g (84,6%) amorf, cím szerinti vegyületet kapunk. 65 [<*]d = -3,9° (c = 1, vízben). I
