198085. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, véralvadásgátló hatású hirudinszármazékok és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
(19) HU MAGYAR KÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS (11) (13) 198 085 B (21) (1341/85) (22) A bejele ítés napja: 85. 04. 11. Módosítási elsőbbsége: 87. 04. 09. (7902/87) A bejelentés elsőbbsége: (33) DE (32) 84. 04. 18. (31) (P 34 14 593.1) (41) (42) Közzététel napja: 26.02.28. (45) A leírás megjelent: 90. 09. 28. Nemzetközi osztályjelzet: (51) Int. C1.4: C 07 K 3/02; C 07 K 7/10; A 61 K 37/64 Tir Feltalálóik): (72) dr. TRIPIER Dominique, Eppstcin/Taunus, DE Szabadalmas: (73) Hoechst AG., Frankfurt/Main, DE (54) ELJÁRÁS ÚJ, VÉRALVADÁSGÁTLÓ HATÁSÚ HIRUDIN SZÁRMAZÉKOK ES AZ EZEKET HATÓANYAGKÉNT TARTALMAZÓ GYÓGYÁSZATI KÉSZÍTMÉNYEK ELŐÁLLÍTÁSÁRA (57) KIVONAT A találmány tárgya eljárás nagytisztaságú új (1) általános képletű polipeptidek, valamint ezek fiziológiailag elfogadható savaddíciós sóinak előállítására - a képletben R jelentése hidrogénatom vagy S03H, X jelentése Ile, Leu, Y jelentése Thr és m értéke 0 vagy 1, amikoris a 6 Cys-csoport közül kettő az 5, 13, 15, 21, 27 és 38 helyen diszulfid hídon keresztül kapcsolódik. A találmány szerinti eljárást úgy végzik, hogy a) az (I) általános képletű polipetidek — amelyek képletében X jelentése He, Y jelentése Thr és R jelentése H vagy —S03H és m értéke 0 vagy 1 — előállítására a Híradó medicinalis férgek első részét 0,01—5 tömeg%-os NaCl oldattal extrahálják, a protestitikus enzimet hőkezeléssel eltávolítják, a kapott fehérje oldatot (NH4)2S04 telített oldatával kicsapják és a csapadékot NH4HC03 vizes oldatban feloldják, ezt követően 500 000 Dalton kapillármembránnai és 10 000 Dalton síkmembránnal szűrik, fagyasztva szárítják, szilikagélen analitikai kromatografálással előtisztítják, az eluátumot szilikagélszármazékon, előnyösen oktadecilszilánszármazékon túlnyomásos oszlopkromatográfiával tisztítják, b) az (1) általános képletű polipeptidek - amelyek képletében X jelentése He vagy Leu, Y jelentése Thr, R jelentése H, m értéke 0 vagy 1 — előállítására a (III) képletű Val’-Val2-Tyr3-Thr4- Asp5-Cas6 aminoterminális hirudin származékot píridin/víz pufferban izocianáttal, előnyösen fenilizotiocianáttal reagáltatják, és az első aminosavat lehasítják, majd a reakciót megismételik, és az így kapott pepiidet egy U—(X)m—Y—OH általános képletű peptid reakcióképes szánnazékával, így aktív észterével reagáltatják — a képletben m, X és Y jelentése a (I) általános képletben megadott, U jelentése Boc a Lys-en levő' e-aminocsoporthoz kötött karbamoil-származék-csoportot és az uretán védőcsoportot lehasítják és a fenti eljárásokkal kapott polipeptidet kívánt esetben fiziológiailag elfogadható savaddíciós sóvá alakítják. 1 3 3 < 5 6 7 < 9 10 II 12 13 U Tyr—Tht—Asp -Cys -Thr -GIu- Ser-Gly-Gtn-Asn -Leu — Cys -Leu — 15 16 17 18 19 23 21 22 23 21 25 25 27 28 — Cys~Gtu“G!y — Ser—Asn—Val—Cys— Giy— Gin—Giy — Asn — Ly*—Cys —He — 25 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 — leu—Ely— Ser—Asp-Gly—Glu—Lys—Asn-Gln—Cys—Val—Thr —Giy — GIu — 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 $S —Cly — Thr—Pro—Vjr»—Pra-G(n—S«r-His—Aso—Asp—Cly— Asp — Phe—Ctu— 57 58 5« 60 81 62 83 84 — Glu — lie -- Pyo — GIu—Glu—Tyt ) — L*u— Gin— -OH 0)
