197945. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új peptid antibiotikumok és ilyen hatóanyagot tartalmazó készítmények előállítására
197945 3. példa 3,4 mg (V) képletű vegyület, 3,7 mg N,N’-diciklo-hexil-karbodiimid és 2,8 mg 1-hidroxi-1,2,3-benzotriazol elegyét 1 ml dimetil-formamidban szobahőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük. Az oldathoz azután 5 mg (XI) képletű vegyületet adunk és a keverést további 3 óra hosszat folytatjuk, majd a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk. A maradékot metanolban oldjuk és preparatív nagynyomású folyadékkromatográfiával tisztítjuk, az előzőekben említettel azonos oszlop és azonos mobil fázis alkalmazásával. Ily módon 4 mg BU-2867T A antibiotikumot (az elméleti hozam 45%-a) kapunk. A termék vékonyréteg- és nagynyomású folyadékkromatográfiai vizsgálati adatai egyeznek a 2. példában megadottakkal; a terméknek a természetes BU- 2867T A antibiotikummal való közvetlen öszszehasonlítása is a két anyag azonosságát igazolja. A kiindulási anyagként alkalmazott (XI) képletű vegyület szokásos módszerek alkalmazásával állítható elő a (VIII) képletű vegyületből. 44 mg N-terc-butoxi-karbonil-L-treonin, 40 mg N,N’-diciklohexil-karbodiimid és 30 mg l-hidroxi-l,2,3-benzotriazol elegyét 4 ml dimetil-formamidban szobahőmérsékleten keverjük és 40 mg (VIII) képletű vegyületet adunk hozzá. További keverés után a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk és a maradékot fordított fázisú szilikagél (C18, 40 ml) oszlopon kromatografáljuk; metanol és víz 1:9-től 2:3-ig változó arányú elegyével eluálunk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk és a maradékot liofilizáljuk; ily módon 51 mg N-BOC-L-treonil-VIII (=BOC-XI) vegyületet (az elméleti hozam 69%-a) kapunk BOC=butoxi-karbonil-csoport). IR (KBr): vo=o = 1690 és 1640 cm-1. 'H-NMR (80 MHz, DMSO-d6): 6=1,00 (3H, d), 1,22 (3H, d), 1,35 (9H, S), 6,11 (1H, d), 6,33 (1H, dd) stb. ppm. 36 mg BOC-XI vegyület és 1 ml hangyasav elegyét szobahőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük. A reakcióelegyet bepároljuk, 1 ml vízzel hígítjuk, majd 10,0 pH-értékre állítjuk be. Ezt az elegyet fordított fázisú szilikagél (Cl8, 20 ml) oszlopra visszük. Az oszlopot vízzel eluáljuk és az eluátumot ninhidrinnel vizsgáljuk. A kívánt terméket tartalmazó eluátum-frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. Ily módon 25 mg (XI) képletű vegyületet (az elméleti hozam 88%-a) kapunk fehér szilárd termék alakjában. IR (KBr): vo*o=1650 cm-1. 'H-NMR (DMSO-d6): 6=1,04 (3H, d), 1,22 (3H, d), 6,14 (1H, d), 6,42 (1H, dd), 7,35 (1H, t, NH), 7,98 (1H, d, NH), 8,65 (1H, d, NH) stb. ppm. EI-MT. M+ m/z 342. így tehát a találmány szerinti új antibiotikumok szintetikusan előállíthatok bármilyen forrásból kapott (VIII) és (XI) képletű 10 17 vegyületekből, a megfelelő savakkal történő reagáltatás útján. Továbbá, a (VIII) és (XI) kiindulási anyagokból előállított vegyületekből további, ugyancsak a találmány körébe tartozó antibiotikumok is előállíthatok. így például a szintetikusan előállított vagy nagyobb hozammal fermentáció útján nyerhető BU-2867T A antibiotikum felhasználható a BU-2867T B illetőleg BU-2867T C antibiotikumnak az előállítására, enzimes hidrolízis és a kívánt savval a fent leírt módon történő reagáltatás útján. A BU-2867T antibiotikumok fermentáció útján történő előállítása során a kapott hozam, valamint az A, B és C frakciók egymás közötti aránya a Polyangium brachysporum K48- B101 mikroorganizmussal való fermentáció ese‘én különféle zsíroknak és olajoknak, továbbá bizonyos felületaktív szereknek a fermentációs közeghez adása útján befolyásolható. így például, ha szójaolajat, tengericsiraolajat, olívaolajat, hidrogénezett növényi olajat adunk a fermentációs közeghez, a BU- 2867T antibiotikumok összhozama növelhető. Hasonló hatás érhető el kisebb mértékben sertészsír vagy faggyú hozzáadása útján isr. Linói savat (C18;2) nagy mennyiségi arányban tartalmazó zsírok és olajok, mint szójaolaj, tengericsíraolaj vagy sertészsír hozzáadása nö\eli a BU-2867T B antibiotikum mennyiségi arányát a termékben. Oleinsavat (CI8;1) nagy mennyiségi arányban tartalmazó olajok mint az olívaolaj, a BU-2867T C antibiotikum képződési arányát növelik. Hidrogénezett növéryi olajok, amelyek sztearinsavban (C,8.0) gazdagok, csupán a BU-2867T A antibiotikum mennyiségi arányát növelik. Antimikrobiális aktivitás: A BU-2867T A, B és C antibiotikumok különféle mikroorganizmusokkal szembeni minimális gátló koncentrációját (MIC) agar-sorozathígítási módszerrel határozhatjuk meg. Eiken-féle agar-tápközeget alkalmaztunk a bat tóriumok szaporítására és Sabouraud-de<tróz agart (Difco) a gombák szaporítására. Az inokulum koncentrációját baktériumok esetében 104 CFU/ml-re, gombák esetében 105—107 CFU/ml-re állítottuk be a meghatározási kísérlet során. A kapott eredményeket, a BU-2867T A, B és C antibiotikumok in vitro mutatott baktérium' Uenes aktivitását az 5. táblázatban foglal! uk össze. Az A és C komponensek nem gátollák a gram-pozitív és gram-negatív baktér umok fejlődését 50 pg/ml koncentrációban, míg a B komponens mérsékelt aktivitást mutatott egyes gram-pozitív baktériumok ellen. A BU-2867T antibiotikumok gombaellenes aktivitását a 6. táblázat mutatja. A C komponens erős gombaellenes aktivitást mutatott olyan klinikailag fontos patogén gombák ellen, mint a Candida albicans, Cryptpcoccus necformans, Aspergillus fumigatus, Trichophyton mentagrophytes és Mucor spinosus. 18 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
