197945. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új peptid antibiotikumok és ilyen hatóanyagot tartalmazó készítmények előállítására
197945 és a (IV) aminosav e-aminocsoportja karbonilcsoporthoz van kötve és így amidot képez, míg a (IV) aminosav a-aminocsoportja szabad. Mindezek a kísérleti eredmények a (VII) illetőleg (VIII) képlet szerinti szerkezetet igazolják. A BU-2867T A antibiotikum enzimes lebontása vagy papainnal Vagy kimopapainnal történő hidrolízise során szintén keletkezik a (VII) és (VIII) képletű vegyület. 4 g BU-2867T A és 50 g papain (Sigma P-3375) elegyét 20 liter 10%-os vizes metanolban 28°C hőmérsékleten 22 óra hosszat keverjük, majd az elegyet ecetsavval 3,3 pH-értékre savanyítva 10 liter etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos kivonat bepárlása útján 6,3 g olajszerű maradékot kapunk; ezt szilikagélen (Wakogel C-200, 250 ml) diklór-metán és metanol 9:1 arányú elegyével kromatografálva 3,3 g (VII) képletű vegyületet kapunk, félig tiszta, olajszerű alakban. Ennek az olajszerű terméknek Sephadex LH-20 gyantán történő további kromatografáiása és ezt követően kristályosítás útján tiszta (VII) képletű vegyületet kapunk színtelen tűkristályok alakjában; hozam: 1,15 g (az elméleti hozam 50%a); op.: 90—91°C; [a]*7=+17,4° (c=0,5, metanolban). Elemzési adatok: a C16H27N04.H20 képlet alapján számított értékek: C 60,93%, H9,27%, N 4,44%; talált értékek: C 61,34%; H9,03%, N4,20%. EI-MT: m/z 279 (M+-H20). UV kmax (CH3OH) nm ( ): 260 (28 000). IR (KBr): vma*=3520, 3410, 3300, 1720, 1690, 1655, 1630 stb. cm-'. ‘H-NMR (80 MHz, DMSO-d6): 6=0,88 (3H, t), 1,06 (3H, d), 6,20 (3H, m), 7,00 (1H, m), 7,84 (1H, d, NH) stb. Az elegyet etil-acetáttal extraháljuk, a savas vizes fázist elkülönítjük és bepároljuk szárazra. A kapott 36 g maradékot vízben oldjuk (50 ml), az oldatot 9,0 pH-értékre állítjuk be és fordított fázisú szilícium-dioxid Clg, Merck, (1,6 liter) oszlopra visszük. Az oszlopot vízzel eluáljuk; a (VIII) képletű vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot 250 ml Sephadex LH-20 gyantán kromatografáljuk 50%-os vízzel metanollal, majd fordított fázisú szilícium-dioxid (C,8) oszlopon, amelyet híg sósavval 3,0 pH-értékre savanyított vízzel eluálunk. Az eluátumból 747 mg tiszta (VIII) képletű vegyületet (az elméleti hozam 35%-a) kapunk a 190°C-on bomlás közben olvadó hidroklorid alakjában; [a]^6=—113° (c=0,5, H20). d EI-MT: m/z 241 (M+). UV: vég-abszorpció. IR (KBr): vma,=3400, 1660, 1620, 1530, stb. cm '. 11 'H-NMR (80 MHz, DMSO-d6): 6=1,27 (3H, d), 1,4—1,8 (4H), 2,98 (2H, m), 4,52 (1H, m), 6,19, (1H, d), 6,45 (1H, dd), 7,43 (1H, t, NM), 9,46 (1H, d, NH). Elemzési adatok: a CnH9N303.HCl.H20 képlet alapján számított értékek: C 44,67%, H 7,50%, N 14,21%, Cl 11,99%; +alált értékek: C 45,04%, H7,82%, N 13,81%, Cl 12,55%. A BU-2867T A antibiotikum ninhidriddel negatív reakciót ad és nem tartalmaz titrálható csoportot, ezért logikusan következik, hogy ez az antibiotikum a (VII) képletű vegyületből és ehhez peptid-kötéssel kapcsolódó (VIII) képletű vegyületből áll. 6 n sósavoldattal melegítve mind a BU- 2867T B, mind a BU-2867T C antibiotikumból ugyanazt az aminosav-komplexet kapjuk, mint a BU-2867T A antibiotikumból. Ha e két antibiotikum hidrolizátumából a zsírsav-molekularészeket extraháljuk és diazo-metánnal kezeljük, akkor a BU-2867T B és C antibiotikumokból egyaránt a megfelelő metilésztert [az alábbiakban: (IX), ill. (X) vegyület] kapjuk. Ezek az észterek megtartják az eredeti antibiotikumra jellemző UV-maximum értéket: knax (CH3OH)=260 nm. A (IX) észter EI-MS spektruma molekuláris iont mutat m/z 236- nál, ami azt mutatja", hogy ez a vegyület három kettőskötést tartalmazó 14 szénatomos karbonsavészter. Az UV és 'H-NMR spektrumok határozottan 2(E),4 (E)-diénsav szerkezetet mutatnak, egy különálló harmadik kettőskötéssel a (IX) vegyületben. A (IX) vegyület ozonolízise és a kapott ozonid ezt követő lebontása útján egy n-hexanol származékot kapunk, amelyet elkülönítés után 2,4-dinitro-fenil-hidrazonként azonosítottunk (EI-MT M+: m/z 280). Ezek az adatok azt bizonyítják, hogy a (IX) vegyület 2(E) ,4(E),8-tetradekatriénsav-metilészter. A (X) észter (EI-MT M+: m/z 238) molekulatömege alapján ez a vegyület egy C2H4- -egységgel többet tartalmaz, mint a (VI) vegyület, ami megfelel a BU-2867T A és a BU-2867T C antibiotikumok közötti molekulaképiet-különbségnek. Ez a tény, az 'H-NMR és UV spektrum-adatokat is figyelembe véve arra mutat, hogy a (X) vegyület 2(E),4(E)tetradekadiénsav-metilészter. A fent leírt kísérleti adatok tehát azt mulatják, hogy a BU-2867T A, B és C antibiotikumok szerkezete az (A) általános képletnek felel meg; ahol az R jelentése az egyes antibiotikumokban: 3U-2867T A: R=CH3-(CH2)6- 3U-2867TB: R=CH3-(CH2)4-CH=CH- (CH2)2-3U-2867T C: R=CH3- (CH2)8-12 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
