197931. lajstromszámú szabadalom • Eljárás magas antitrombotikus aktivitású mukopoliszacharid kompozíciók előállítására
197931 A találmány tárgya eljárás magas antitrombotikus aktivitású mukopoliszacharíd-kompozíciók előállítására. Ismeretes, hogy az ilyen típusú kompozíciókat heparinból alkoholos extrakcióval vagy pedig kémiai vagy enzimatikus úton végrehajtott depolimerizálással állították elő. Általában ezek az ismert eljárások lehetővé teszik olyan kompozíciók vagy frakciók előállítását, amelyek legfeljebb mintegy 25—30 egységet tartalmazó iáncúak, az úgynevezett Yin-Wessler titerreí (YW) mért anti-Xa aktivitásuk nagyobb, mint a hepariné (a heparin YW- és USP-titerje 160 egység/mg körüli) és az USP titerreí (definícióját lásd: Amerikai Egyesült Államok Gyógyszerkönyve, 1985. január 1-jén megjelent 16. kiadás) kifejezett ossz antikoaguláns-aktivitásuk kisebb, mint a hepariné, sőt ez a titer lehet igen alacsony értékű, akár nulla. fgy például a 2 944 792 sz. NSZK-beli közrebocsátási iratban olyan mukopoliszacharid-frakciókat ismertetnek, amelyek YW titere mintegy 160 egység/mg és USP titere mintegy 45 egység/mg, így az aktivitási arány mintegy 3,55, vagyis nagyobb, mint a kiindulási hepariné (1). Az előállításukra szolgáló alkoholos extrakciós eljárás hozama ugyanakkor nagyon alacsony, mintegy I %. A WO 82 03 627 számú PCT közzétételi irat szerinti eljárással kapott termékek esetében az YW/USP arány mindig legalább 10, konkrét példája szerint 13, vagyis itt is jóval nagyobb, mint a kiindulási hepariné. Célul tűztük ki tehát nagy stabilitású mukopoliszacharidok nagy mennyiségekben, jó hozammal történő előállítását. A találmány szerinti termékek értékesek olyan szempontból, hogy specifikusabb hatást fejtenek ki a heparinnál a koagulációs folyamat egyes lépései során. Egy adott kezelés során a terméket YW titere és YW/USP titer-aránya alapján választjuk meg. Ilyen vonatkozásban végeztünk tehát olyan kísérleteket, amelyek adott profilú, azaz adott YW titerű és YW/USP titer-arányú kompozíciók könnyű előállithatóságára vonatkoztak. Megfigyeltük, hogy meghatározott műveleti paramétereket betartva lehetségessé válik egyéb mukopoliszacharid-kompozicióktól az ilyen termékeket elkülöníteni. A találmány célja tehát olyan új eljárás kidolgozása, amellyel lehetővé válik magas antibiotikus aktivitású mukopoliszacharid-kompozíciók előállítása más mukopoliszacharid-kompozíciók kezelése útján és amellyel egyszerűen állíthatók elő és könnyen hozzáférhetővé tehetők igen hasznos termékek. Felismertük, hogy ez a célkitűzés teljesíthető, ha túlnyomórészt mintegy 1800—8000 dal ton molekulatömegű, a heparinénál nagyobb YW titerű és YW/USP titer-arányú mukopoliszacharid-láncokbó! felépülő kompozíciókat legalább egy frakcionálási lépésnek vetünk alá és így szelektíven eltávolítjuk ezekből a kompozíciókból a-mintegy 2000-nél kisebb mole- 2 1 kulatömegű láncoknak és azoknak a láncoknak legalább a nagyobb részét, amelyeknek a szulfáttartalma alacsonyabb a lánckeverék szulfáttartalmánál, majd végül az ezektől a láncoktól. megszabadított frakciókat elkülönítjük. Ezek az említett frakciók YW/USP titer-aránya kisebb, mint a kiindulási kompozícióké, azonban nagyobb, mint a hepariné, ugyanakkor USP-titerük kisebb, mint a kiindulási kompozícióké. Előnyösen a frakcionálási lépést szervetlen sót tartalmazó víz és szerves oldószer elegyével hajtjuk végre, a szerves oldószert azok közül megválasztva, amelyekben az előállítani kívánt termékeknek legalább a többsége szelektíven oldhatatlan és kicsapódik. A szervetlen só és a szerves oldószer viszonylagos arányát beállítjuk és a reakcióközeg megfelelő pH-értékének biztosításával elősegítjük a mukopoliszacharid-Iáncok kívánt kicsapódását. A találmány szerinti eljárás egy előnyös megvalósításti módja értelmében szerves oldószerként alkohol típusú oldószert különösen előnyösen etanolt használunk. A találmány szerinti eljárás egy másik előnyös megvalósítási módja értelmében szervetlen sóként nátrium- vagy kálium-kloridot vagy bármely más, a felhasznált szerves oldószerrel elegyedő sót használunk. A találmány szerinti eljárás egy még további előnyös megvalósítási módja értelmében a reakcióelegy pH-értékét savas értékre, különösen előnyösen 4-nél alacsonyabb értékre állítjuk be. A találmány szerinti eljárás értelmében a frakcionáláshoz kiindulási anyagként olyan mukopoiiszacharid-kompozíciókat használunk amelyeknél a láncok többségének a molekulatömege mintegy 1800—8000, YW/USP titer-aránya legalább 10 és YW-titere mintegy 200—250 egység/mg. Az YW-titert, azaz a Yin -Wessler titert az anti-Xa aktivitás mérésére használjuk Yin és munkatársai által a J. Láb. Clin. Med., 81.298 (1973) szakirodalmi helyen ismertetett módon. Ezeket a mukopoliszacharid-kompoziciókat előnyösen heparinnak kémiai ágenssel, például salétromsavval végzett részleges depolímerizálása útján állíthatjuk elő. Itt elsősorban a 78 31357 számú francia szabadalmunkhoz benyújtott 80 06 282 számú francia pótszabadalmunkra hivatkozunk, mint ilyen eljárást ismertető szakirodalomra. Előnyösen a végrehajtott depolimerizálási eljárás a depolimerizációs reakciónak önszabályozásán alapul, mint amilyent a 81 07 283 számú francia szabadalmunkra ismertetünk. Ezen önszabályozott depolimerizálás legtágabb aspektusában a heparit salétromsavval reagáltatjuk mintegy 2 és 3 közötti, előnyösen 2,5 pH-értékű vizes közegben, a heparin koncentrációját legalább mintegy 8 tömeg% értékre és a salétromossav molaritását mintegy 0,02—0,1 értékre beállítva. 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
