197926. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glikopeptid antibiotikumok kinyerésére
197926 A találmány glikopeptid antibiotikumok vizes oldatokból való kinyerésére vonatkozik, amely oldatok fermentlevekből származnak, vagy a feldolgozás során keletkeznek. Az eljárás a következő glikopeptid antibiotikumok esetén alkalmazható: teikoplanin, deglükoteikoplanin, L-17046 és L-17054 jelű antibiotikum, teikoplanin T-A2 faktor, a T-A2 faktor 5 főbb komponenseinek bármelyike, teikoplanin-amid-, és teikoplanin-észter-származékok és az A-40926 jelű antibiotikum. Biológiailag aktív anyagok (ideértve az antibiotikumokat) vizes közegekből egy szilárd mátrixon bekövetkező adszorpció segítségével való elkülönítését a 3531463 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismerteti. Ebben az eljárásban nem-ionogén, makró-hálós, vízoldhatatlan polivinii-benzol gyantákat alkalmaztak. Risztocetinnek a szűrt fermentléből való kinyerését savas csoportokat tartalmazó kátioncserélő gyantákon való adszorpciójával — a 813559 sz. nagy-britanniai szabadalmi leírás' ismerteti. A vankomicin és az aktaplanin antibiotikum makropórusos, funkcionálisan át nem alakított stirol-d i vini 1 ben - zol kopolimer gyantákon való adszorpció segítségével végzett kinyerését és tisztítását a 4440753 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás tárgyalja. Az A-4696 antibiotikum (aktaplanin) egyes komponenseinek egy tisztított A-4696 komplex készítményből — poliamid oszlopon végzett oszlopkromatográfia segítségével — való elkülönítését a 4322406 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetik. Kristályos A-4696 antibiotikumnak a fermentléből elkülönített nyers A-4696-hidrokloridból történő előállítását a 4064233 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás írja le. Ebben az esetben a nyers A-4696 komplexek a fermentléből való elkülönítése több nehézkes műveletet foglal magába, amilyen a szénoszlopon történő adszorpció, elúció, a szulfát-ionok eltávolítása, betöményítés, oldás vízben, újabb adszorpció aktív szénen, újabb elúció sósav/aceton eleggyel, az eluátufn betöményítése és a nyers A-4696-hidroklorid metanol hozzáadásával történő kicsapása. Az elkülönített nyers A-4696-hidrokloridot ezután vízben oldjuk és az oldatot egy poliamid gyanta oszlopon vehetik át, amelyet a továbbiakban vízárammal mosnak. Az antibiotikumot az elfolyóból bepárlással nyerik ki, majd ezt az anyagot vizes metanolban oldják, az oldatot HCl-val megsavanyítják és acetonos kicsapással a tisztított A-4696- -hidrokloridot állítják elő, amelyet vizes etanolból átkristályosítanak. Az A-35512 antibiotikum egyes komponenseinek egy elkülönített komplex mintából, nagyteljesítményű folyadékkromatográ-1 fia segítségével való szétválasztását — stacionárius fázisként poliamid gyanta alkalmazásával — a 4122168 sz.* amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás tárgyalja. Ebben az esetben a komplexnek a fermentléből való előzetes elkülönítését egy makropórusos nem-ionos polistirol gyantán (Amberlite XAD-4) történő adszorpcióval végzik. Glikopeptid antibiotikumok kinyerésére és tisztítására vonatkozó példákat (D-alanin-oligopeptidet tartalmazó immobilizált ligandon végzett affinitáskromatográfia segítségével) ismertet a 122969, illetőleg a 132117 számú közzétett európai szabadalmi leírás. Az előbbiekben említett egyik irodalmi hely sem írja le glikopeptid antibiotikumok vizes oldatokból, poliamid mátrixon való adszorpció segítségével való elkülönítését, amely vizes oldatok a fermentlevekből származnak vagy a feldolgozás során keletkeznek. Az idézett közlemények szerint a poliamid mátrixon végzett kromatográfia felhasználható glikopeptid antibiotikum komplexekből az egyes komponensek elkülönítésére, miután a komplexet más módon kinyerték a fermentléből. Az irodalomban megtalálható valamennyi példa, amely konkrétan glikopeptid antibiotikumoknak a fermentléből egy szilárd mátrixon, adszorpció segítségével való kinyerésére vonatkozik, ioncserélő gyanták vagy makropórusos nemionos polisztirol gyanták alkalmazását említi. A találmány kidolgozása során azt találtuk,' hogy glikopeptid antibiotikumok célszerűen elkülöníthetők olyan vizes oldatokból, melyek ezeket az anyagokat különböző típusú és eredetű, jelentős mennyiségű, többféle nemkívánt termékkel együtt tartalmazzák bizonyos poliamid gyantákon végzett adszorpciós. kromatográfiával, amelyet vizes elegyekkel való elúció követ. A találmány tárgya tehát eljárás glikopeptid antibiotikumok vizes oldatokból való kinyerésére, mely eljárásra az jellemző, hogy egy ilyen vizes oldatot érintkezésbe hozunk egy, az említett antibiotikum adszorbeálására képes poliamid kromatográfiás gyantával, a gyantát elkülönítjük a vizes oldatból, a kinyert gyantát egy vizes eluáló eleggyel mossuk és ebből az eluensből kinyerjük a glikopeptid antibiotikumot. A glikopeptid antibiotikumokat nemkívánt termékek mellett tartalmazó vizes oldatok jellegzetes példái a micéliumtól megszűrt fermentlevek vagy a feldolgozás során keletkező, részlegesen tisztított oldatok. Az említett nemkívánt kísérő termékekre példák — egyebek között — a színes szenynyezések, melléktermékek, a gyártási folyamatban nem reagált reagensek, valamint a fermentációs táptalajokban jelenlevő sók és vízoldható komponensek. A találmány szerinti eljárás teikoplaninnak, deglükoteikoplaninnak, teikoplanin T-A2 faktornak, a teikoplanin T-A2 faktor öt fő kom2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
