197917. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklinon-vázas glikozidok tisztítására gyantákon való szelektív adszorpció útján
cint tartalmaz. Ennek pH-ját híg sósavval 2,5-re állítjuk, acetont adunk hozzá, és 5°C hőmérsékleten 6 órán át állni hagyjuk. Az eközben kikristályosodó terméket kiszűrjük, acetonnal mossuk és csökkentett nyomáson, 12 órán át szárítjuk. A kiindulási nyerstermékre számítva 80%os termeléssel kapjuk a tisztított daunorubicint, amelynek titere 97%; és amely 2,6% szennyezést tartalmaz (HPLC eljárással meghatározva). 3a) példa A 4-demetoxi-doxorubicin tisztítása (a technika állása szerinti eljárással) 48 g nyers 4-demetoxi-doxorubidint — amelynek szennyezés-tartalma 14% — 2000 ml vízben oldunk. Az oldathoz 1000 g nátrium-formiátot adunk és a pH-t 3,6—4,0- ra állítjuk be. 1800 ml metilalkoholt adagolunk és az oldatot ismételten extraháljuk kloroformmal; az extraktumokat elvezetjük. 1800 ml metilalkohol és 2000 ml kloroform hozzáadása után a pH-t vizes nátriumhidrogénkarbonát oldat hozzáadásával 7,0-ra állítjuk be. A fázisokat szétválasztjuk és a vizes fázist kimerítően extraháljuk kloroformmal. Az egyesített szerves kivonatokat szárítjuk és kb. 3000 ml térfogatra töményítjük be. 200 ml n-propil-alkoholt adunk a koncentrátumhoz. Az oldat pH-ját metanolos sósav-oldattal 2,0-ra állítjuk be. 12000 ml acetont adunk hozzá és a terméket 0°C-on 3 órán át kristályosítjuk. Szűrés és hideg acetonnal való mosás után a terméket vákuumban szárítjuk. 17.3 g 4-demetoxi-doxorubicin-hidrokloridot kapunk, amelynek szennyezés-tartalma 5%. 3b) példa A 4-demetoxi-doxorubicin tisztítása (a találmány szerinti továbbfejlesztett eljárással) 10.4 g 4-demetoxi-doxorubicint (szennyezés: 14%) tartalmazó, 2000 ml vizes oldatot felviszünk egy 50 ml Amberlite ER180r (Rohm and Haas) gyantával töltött, 2,5 cm átmérőjű oszlopra; áramlási sebesség: 250 ml/ /óra. Az így, a szennyezések szelektív adszorpciója útján részlegesen megtisztított, pH 3,0 értékű eluátumot ezután felvisszük egy 200 ml CM Sepharose Cl 6B (Pharmacia) gyantával töltött oszlopra. Az oszlopot metanol, víz és tömény sósav pH 2,1 értékű, 50:50:0,015 arányú elegyével eluáljuk. Az első, körülbelül 800 ml térfogatú, aglikonokat és más szenynyezéseket tartalmazó frakciókat elöntjük. A következő 2000 ml térfogatú, tiszta terméket tartalmazó eluátumot csökkentett nyomáson 60 ml térfogatra betöményítjük. A betöményített oldathoz hozzáadunk 300 ml ace-5 4 tont, 3 óra alatt, kevertetés közben. A kivált csapadékot kiszűrjük, acetonnal mossuk és megszárítjuk. Ily módon 6,5 g tiszta 4-demetoxi-doxorubicint (hozam: az elméletileg számított 58,2%-a) kapunk, amely 3% szennyezést tartalmaz. 4a) példa A4’-dezoxi-doxorubicin tisztítása (a technika állása szerinti eljárással) 40.0 g szennyezett 4’-dezoxi-doxorubicint, amelynek titere 65%, 1000 ml 9:1 térfogatarányú metilén-klorid.etanol elegyben szuszpendálunk. A szuszpenzióhoz erőteljes kevertetés közben hozzáadunk 50,0 g szilikagél 60-at (230— 400 mesh) — US Burean of Standards szerint (0,065—0,037 mm) — és a szuszpenziót egy 10 cm átmérőjű szalagon kromatografáljuk, amely 1,5 kg szilikagél 60-at (230— 400 mesh) — az US Burean of Standards szerint (0,065—0,037 mm) — tartalmaz. A terméket először 15 liter 9:1 térfogatarányú metilén-klorid:etanol eleggyel, majd 25 liter 80:19:1 térfogatarányú metilén-klorid:etanol:víz eleggyel eluáljuk. A terméket tartalmazó eluátumot vákuumban kis térfogatra töményítjük be, a pH-t 0,1 N HCl-lel 4,5-re állítjuk be és a terméket 1500 ml etiléter hozzáadásával kicsapjuk. Szűrés, etiléteres mosás és vákuumban való szárítás után 27,0 g 4’-dezoxi-daunorubicin-hidrokloriddal kapunk (kitermelés: 60%), amelynek titere 90% és szennyezés-tartaíma 10%. 4b) példa A 4’-dezoxi-doxorubicin tisztítása (a találmány szerinti továbbfejlesztett eljárással) 15.0 g, 69,2% titerű 4’dezoxi-doxorubicint, amely 12% szerves szennyezést, továbbá 12% ásványi sót tartalmaz, feloldunk 2000 ml vízben, és az oldatot felvisszük egy 300 ml CM Sephadex C25 gyantával töltött oszlopra; áramlási sebesség: 600 ml/óra. Az adszorpció befejezése után az oszlopot 0,03%os sósavval eluáljuk, és 6500 ml térfogatú eluátumot gyűjtünk, amely eluátum a 4’-dezoxi-doxorubicint tartalmazza. Az említett frakció pH-ját nátrium-hidroxid-oldat segítségével 3,8-ra állítjuk, majd az oldatot felvisszük egy 200 ml S112 Kastell-gyantával töltött oszlopra; áramlási sebesség: 400 ml/óra. Az oszlopot 600 ml vízzel mossuk, majd sósavval pH=2,0-ra állított metanollal eluáljuk. így 600 ml eluátumot kapunk, amelyet csökkentett nyomáson 60 ml térfogatra betöményítünk. A betöményített oldatot keverés közben lassan hozzáöntjük 600 ml acetonhoz, a kivált csapadékot kiszűrjük, acetonnal mossuk és megszárítjuk. Ily módon 4’-dezoxi-doxorubicint kapunk (hozam: az elméletileg számított 61%-a), amelynek titere 95,8%, és amely 4,2% szenynyezést tartalmaz. 6 197917 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 66
