197915. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorgátló hatású új BBM-1675 C és D antibiotikum és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
197915 A BBM-1675C és a BBM-1675D kémiai előállítása és izolálása 1. példa A BBM- 1675A, 50 mg-os mintáját feloldjuk 2.5 ml metanolban, majd hozzáadjűk hidrogén-klorid 0,1 mólos metanolos oldatának 2.5 ml-ét. A reagáltatást körülbelül 50°C-on végezzük, és a kiindulási anyag eltűnését (körülbelül 30 perc) minden 5—10 percben vékonyréteg-kromatográfiásan (TLC) követjük, szilikagél lapon (Analtech, 250 mikron, GF), az eluáláshoz toluol és aceton 3:2 térfogatarányú elegyét használva. Miután a kiindulási anyag elfogyott, a reakcióelegyet nátrium-hidrogén-karbonát telített metanolos oldatával semlegesítjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk A kapott száraz maradék tartalmazza a bioaktív fragmentumokat. A BMM-1675C-Í „flash“ oszlop-kromatográfiás módszerrel, egy 2 cm belső átmérőjű, 10 cm-es, Woelm szilikagél lel töltött (32—63 mikronos részecske méret) oszlopon izoláljuk a maradékból. Az oszlopot toluol és aceton 3:2 térfogatarányú elegyével eluáljuk, 3 ml-es frakciókat gyűjtve. Minden frakciót TLC-ve! analizálunk (szilikagél, toluoLaceton 3:2 tf/tf), és a TLC foltokat 24 nm-es UV fényforrással és ce'rium-szulfát-spray-vel (1% cérium-szulfát és 2,5% molibdénsav 10%-os kénsavban) tesszük láthatóvá. A 6—12. frakciókat összegyűjtjük (Ráérték a BBM-1675C- re 0,28), és szárazra pároljuk. 12 mg (35%) lényegében tiszta BBM-1675C-t kapunk. A BBM-1675C fizikai-kémiai tulajdonságait már megadtuk a leírásban, az ultraibolya, infravörös, tömeg, 'H-NMR és l3C-NMR spektrum adatok pedig az 1,3, 5, 7. és 9. ábrákon szerepelnek. 2. példa Ha az i. példa szerinti reakcióban növeljük a reakcióidőt, a BBM-1675C mennyisége csökken, és két új termék: a 3. képletű vegyület (Rf=0,65) és a BBM-1675D (R/: az alapszinten marad) (TLC: szilikagél, toluoLaceton 3:2 (tf/tf) jelenik meg, és idővel jellemzővé válik. A BBM-1675D vegyületet, amely szokásosan a BBM-1675C keletkezését kíséri az 1. példában ismertetett kromatográfiás oszlopon izoláljuk, az eluáláshoz kloroform és metanol 5:1 térfogatarányú elegyét használva. Az alkalmas frakciókat összegyűjtjük, és szárazra pároljuk. 18 mg lényegében tiszta BBM-1675D-t kapunk az 1. példában ismertetett reakció eredményeképpen. A BBM-1675D egy nagyobb foltot ad Rp=0,37-nél a reverz fázisú TLC mérésnél (Whatman MK.ClgF, 200 mikron), az eluáláshoz 30%-os vizes metanol oldatot használva, és R/=0,22-nél normál fázisú szilikagél TLC mérésben, eluálószerként kloroform és metanol 5:0,5 térfogatarányú elegyét használva. 17 10 3. példa A BBM-1675D hozamában lényeges javulás érhető el, ha a BBM-1675A2 vagy BBM-1675A, kémiai hidrolízise során hidrogén-klorid helyett p-toluol-szulfonsavat használunk, amint ezt a 3. és 5. példák szemléltetik. A BBM-1675A2 15,2 mg-os mintáját 1 ml 0,03 mólos metanolos p-toluol-szulfonsav oldattal hidrolizáljuk körülbelül 63°C-os hőmérsékleten, mintegy egy órán keresztül. Ezután a reakcióelegyet szárazra pároljuk, csökkentett nyomáson, körülbelül 30°C-on. A száraz maradékból a BBM-1675D-Í flash oszlopkromatográfiával izoláljuk, Woelm szilikagéllel töltött oszlopon (részecske méret: 32—63 mikron). Az oszlopot kloroform és metanol 5:0,5 térfogatarányú elegyével eluáljuk, majd az összegyűjtött frakciókat TLC-vel analizáljuk (szilikagél, kloroform:metanol 5:0,5 tf/ /tf). Az alkalmazott kromatográfiás körülmények között a (2) és (3) inaktív vegyületek elegye (7 mg) elkülöníthető a BBM-1675D bioaktív anyagtól, amelynek R/-értéke 0,22. Az alkalmas frakciókat összegyűjtjük és szárazra pároljuk. 8 mg lényegében tiszta BBM-1675D-t kapunk, csaknem kvantitatív kitermeléssel. A BBM-1675D fizikai-kémiai tulajdonságait már megadtuk. Ultraibolya, infravörös, tömeg, 'H-NMR és 13C-NMR spektruma a 2, 4, 6, 8. és 10A és 10B ábrákon látható. 4. példa A BBM-1675A2 40 mg-os mintáját hidrogén-klorid 0,5 mólos metanolos oldatának 5 ml-ével kezeljük, körülbelül 50°C-on, 2 órán keresztül, az 1. példában ismertetett általános eljárást és izolálási módszert követve. Nátrium-hidrogén-karbonáttal végzett semlegesítés és szárazra párlás után a BBM-1675C-t flash oszlop-kromatográfiával izoláljuk a maradékból (Woelm szilikagéllel töltött oszlop, 32—63 mikronos részecskeméret, toluoLaceton 3:2 tf/tf). Az alkalmas frakciókat egyesítjük és szárazra pároljuk. 8,4 mg lényegében tiszta BBM-1675C-t kapunk, amely azonos az 1. példában izolált termékkel. A fenti kromatográfiás oszlopot ezután kloroform és metanol 5:0,25 térfogatarányú elegyével eluáljuk, és az összegyűjtött frakciókat szárazra pároljuk. BBM-1675D-t kapunk. A BBM-1675D-t újabb flash kromatográfiás oszlopon (szilikagél, kloroform:metanol 5:0,5 tf/tf.) tovább tisztítjuk. Az alkalmas frakciókat összegyűjtjük és szárazra pároljuk. 6,3 mg lényegében tiszta BBM-1675D-t kapunk, amely azonos a 3. példában kapott termékkel. 5. példa A BBM-1675A, 49,3 mg-os mintáját 1,5 ml 0,037 mólos metanolos p-toluol-szulfonsav oldattal hidrolizáljuk, körülbelül 60°C-on, 1,5 órán keresztül. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson és körülbelül 30°C-on szárazra pá18 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
