197915. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorgátló hatású új BBM-1675 C és D antibiotikum és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
3 197915 4 A találmány tárgya eljárás az új BBM-1675C, illetve BBM-1675D, vagy másnéven BMY-27305, illetve BMY-27307 tumor-ellenes antibiotikumok előállítására a BBM-I675A, (esperamicin A,) vagy BBM-1675A2 (esperamicin A2) bioaktív komponensek szelektív kémiai hidrolízisével. Az utóbbiak előállítása az Actinomadura verrucosospora egy BBM-1675 termelő törzsének, előnyösen az Actinomadura verrucosospora A1327Y (ATCC 39638) törzsnek vagy ennek valamilyen mutánsa tenyésztésével történik. Közelebbről, a találmány a BBM-1675C előállítására vonatkozik a BBM-1675A, vagy BBM-1675A2 bioaktív komponens szelektív kémiai hidrolízisével. A találmány ezen kívül kiterjed a BBM-1675D előállítására a BBM-1675C vagy — még előnyösebben — a BBM-1675A, vagy BBM-1675A2 bioaktív komponensek szelektív hidrolízisével. A BBM-1675C és BBM-1675D komponensek szokásos kromatográfiás eljárásokkal különíthetők el a reakcióelegyből és tisztíthatok. A BBM-1675C és a BBM-1675D bioaktiv anyagok a mikroorganizmusok széles skálájával szemben antimikrobiális hatást mutatnak, és különböző egér tumor rendszerekben, például P-388 leukémia és B16 melanoma esetében gátló hatást fejtenek ki. A találmány szerint előállított új anyagok ezért antimikrobiális vagy tumor-ellenes, emlősök tumorainak kezelésére alkalmas szerekként hasznosíthatók. A BBM-1675A, (esperamicin A,) illetve a BBM-1675A2 (esperamicin A2) szerkezetének felderítését célzó degradációs vizsgálatok során olyan komponens-elegy keletkezett, amely két inaktív komponens, az 1. illetve 2. képletű vegyületek izolálásához és azonosításához vezetett. Meglepő módon azt találtuk azonban, hogy a kémiai degradáció két bioaktív fragmentum, a BBM-1675C és a BBM-1675D lépcsőzetes felszabadulásához vezetett. Még meglepőbb volt, hogy a két különböző antibiotikum, a BBM-1675A, és A2 azonos bioaktív fragmentumokat eredményeztek, amint ez az 1. reakcióvázlaton látható. Még ennél is meglepőbb, hogy a kisebb molekulatömegű BBM-1675C és D fragmentumokat (amelyek molekulatömege a BBM-1675A,, illetve A2 antibiotikumok molekulatömegének mintegy 70, illetve 55%-a) hatékonyabbnak találtuk, mint a BBM-1675A2-t és hatásukban összevethetőnek a BBM-1675A, gyei, mind a tumor-ellenes, mind az antimikrobiális hatás tekintetében. A BBM-1675C és a BBM-1675D a BBM-1675A, antibiotikum szelektív kémiai hidrolízisével állítható elő a 2. reakcióvázlaton szemléltetett módon. A kiindulási BBM-1675A, vegyület előállítása a 2 141 425 számú közrebocsátott nagy-britanniai szabadalmi leírásban ismertetett eljárással történik. A tisztított BBM-1675A! komponenst egy ásványi vagy egy szerves savval, például hidrogén-kloriddal, kénsavval, p-toluoi-szulfonsavval, benzol-szulfon savval hidrolizáljuk, szerves oldószerben vagy vizes-szerves oldószer elegyében, körülbelül 0°C és az alkalmazott oldószer visszaíolyási hőmérséklete közötti hőmérsékleten, míg a kívánt BBM-1675C vagy BBM-1675D jelentős mennyiségben nem keletkezik. A hidrolízist előnyösen 1—6 szénatomos alkoholokban, legelőnyösebben metanolban végezzük. A reakcióhőmérséklet nem kritikus, de a reagáltatást előnyösen szobahőmérséklet és 60°C között, legelőnyösebben 40—60°C-on végezzük. A BBM-1675A, szelektív hidrolízise lépcsőzetesen megy végbe, melynek első lépésében a BBM-1675C antibiotikum és az 1. képletű inaktív fragmentum keletkezik. A hidrolízis továbbfolytatása azonos körülmények között a 3. képletű tio-cukor alfa- és béta-anomerjei elegyének felszabadulásához és a BBM-1675D antibiotikum keletkezéséhez vezet. Szakember számára nyilvánvaló, hogy a reakciókörülmények, így az idő, a hőmérséklet és a savkoncentráció megváltozása a BBM-1675C és D antibiotikumok keletkezési arányának megváltozásához vezet. így célszerű a reakció előrehaladását — a későbbi példákban szemléltetett módon — vékonyréteg-kromatográfiásan követni. Ha a cél kizárólag a BBM-1675D antibiotikum előállítása a szelektív hidrolízist előnyösen egy szerves savval, például p-toluol-szulfonsavval végezzük, és így a BBM-1675D kvantitatív mennyiséghez jutunk. A BBM-1675C és BBM-1675D anyagok a BBM-1675A2 antibiotikum szelektív kémiai hidrolízisével is előállíthatok, a 3. reakcióvázlaton bemutatott módon. A BBM-1675A2 kiindulási anyag előállítása a 2 141 425. számú közrebocsátott nagy-britanniai szabadalmi leírás szerint történik. A tisztított BBM-1675A2 szelektív hidrolízise szintén lépcsőzetesen zajlik, és először a BBM-1675C antibiotikumot, és a 2. képletű inaktív fragmentumot eredményezi. A további hidrolízis a 3. képletű tio-cukor alfa- és béta-anomerjei elegyének felszabadulásához és a BBM-1675D antibiotikum keletkezéséhez vezet. A BBM-1675A2 szelektív kémiai hidrolíziséhez alkalmazott reakciókörülmények lényegében azonosan a BBM-1675A, hidrolízisével kapcsolatban a fentiekben részletezett körülményekkel. A BBM-1675D BBM-1675A,ből történő előállításához hasonlóan, ha csak BBM-1675D antibiotikumot kívánunk előállítani, a BBM-1675A2 hidrolízisét addig végezzük, amíg lényegében minden BBM-1675A2 és BBM-1675C BBM-1675D-vé alakul. A hidrolízist legelőnyösebben egy szerves savval, így p-toluol-szulfonsavval hajtjuk végre. Az a felismerés, hogy ugyanazok a BBM-1675C és D antibiotikumok keletkeznek két különböző antibiotikumból, a BBM-1675A,-ből 3 5 10 15 20 25 3C 3E 4C 45 50 55 60 65
