197770. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új 9-[(2'R,3'R,4'S)-3'4'-bisz(hidroxi-metil)-2'-oxetanil] hipoxantin és ezt hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
197770 Megjegyzés: A találmány szerint előállított vegyüíetet DMSO-ban oldott formában alkalmazzuk. A DMSO-ban önmagában csak 80—90% a vírus-antigén fejlődés. Az előzőekben bemutatott eredményekből nyilvánvaló, hogy a találmány szerint előállított vegyület jelentős szaporodásgátló hatást fejt ki HIV-ra, ugyanakkor sejtpusztító hatása kicsi. E jellemzői következtében a vegyület várhatóan hasznos gyógyszer az AIDS kezelésére. 2) A következőkben a találmány szerint előállított (I) képletű vegyületek immunszupresszív hatását mutatjuk be: T-limfocita sejtek blasztogenezis reakciójának gátlása Con A-val BALB/C egerek lépsejtjeit szétoszlatva úgy öntjük mikrolemezre, hogy lyukanként (amelyek mindegyike 0,2 ml-es) 2X105 sejt legyen jelen. A kontroll kivételével minden egyes lyukba bevisszük a vizsgálandó vegyületet különböző koncentrációkban. Ezután minden lyukba még 5 pg/1 Con A-t adunk. Ezt követően a sejteket 37°C-on 72 órán tenyésztjük 5 térf% széndioxid-gázt tartalmazó légterű inkubátorban. A limfociták blasztogenezis reakcióját úgy vizsgáljuk, hogy a tenyésztés befejezése előtt 6 órával minden lyukba 1 pCi 3H-timidint adunk, és folyadékszcintillációs számlálóval mérjük ennek a tenyésztett sejtekbe való beépülését. Ha a csak Con A adagolásakor kapott beépülés-értéket Adpm-ként jelöljük, sé azt a beépülés-értéket, amely Con A és a vizsgált hatóanyag együttes adagolásakor mérhető, Bdpm-ként jelöljük, az egyes vizsgált hatóanyagok blasztogenezisre gyakorolt hatását az (1 -Bdpm/Adpm) X100 képlet fejezi ki. Mértük az IC60 értékét (mcg/ml), amelyre a találmány szerint előállított vegyületek esetén 14,5 mcg/ml értéket kaptunk. Minthogy a találmány szerint előállított vegyület immunszupresszív hatással bír, hatóanyagként a találmány szerint előállított vegyüíetet tartalmazó immunszupresszánst meglehetősen hasznosnak találunk a szervvagy bőrátültetés esetén a valószínűen abnormálisán fokozott immunhatás okozta kilökődés gátlására, különféle autoimmunizációs betegségek kezelésére, így szklerózis multiplex, hemolitikus anémia, 1-típusú diabétesz, súlyos izomgyengeség, Hashimoto tireoditisz, Paget szindróma és reuma, valamint allergiás betegségek kezelésére. 3) A találmány szerint előállított vegyület akut toxicitása (LD50) egéren 200mg/kg (i.v.) vagy ezt meghaladó, amely érték alacsonyabb, mint a különféle ismert nukleinsav-típusú antibiotikumok toxicitása. Az előzőekben ismertetett eredményekből nyilvánvaló, hogy a találmány szerint előállított (I) képletű vegyület vírusellenes hazású. Továbbá, minthogy ez a vegyület kémiai szerkezetét tekintve eltérő az eddig ismert 7 nukleinsav-típusú antibiotikumoktól, várhatóan hasznos, új hatásmechanizmussal bíró vírusellenes szer lesz, amely szer különféle vírusok okozta betegségek, például herpesz, AIDS és B-típusú hepatitisz kezelésére alkalmas. Tovóbbá a találmány szerint előállított vegyület immunszupresszív aktivitása folytán várhatóan hasznos immunszupresszáns lesz. A továbbiakban a találmányt példákban mutatjuk be, a példák nem korlátozó jellegűek. 1. példa 78 g (II) általános képletű vegyüíetet 39 ml 0,1 mól/l-es foszfátpufferben oldunk. Az oldathoz 25 pl (9,9 egység) adenozin-dezaminázt (EC3, 5, 4, 4; a Sigma Co. terméke) adunk hozzá, a reagáltatást 25°C-on 5 órán át keverés mellett folytatjuk, majd a reakcióelegyet a reakció leállítására 5 percre 100°C- os hőmérsékletre melegítjük. Ezután az elegye t 50 ml MCI Geb CHP-20P területű oszlopra visszük. A termék az oszlopon adszorbeálódik. Az oszlopot vízzel mossuk, majd a terméket 150 ml 20% víztartalmú metanollal eluáljuk róla. Az eluátumot besűrítjük, és szárazra pároljuk. így 88,1 %-os hozammal 69 mg (I) képletű terméket nyerünk színtelen por formájában. 2. példa 500 ml-es Erlenmeyer lombikokba egyenként 100 ml, 0,3% húskivonat, l,0%pepton és 0,7% nátrium-klorid tartalmú (pH=7,0) tápközeget mérünk, és a lombikokat autoklávban 120°C hőmérsékleten 20 percig sterilezzük. Minden lombik tartalmát egy platina-kacsnyi Escherichia coli NIJH-val oltjuk be, és aerob rázott kultúrában 37°C-on 18 órán á't tenyésztjük. Ezután 1000 ml folyékony tenyészetet 10 000 fordulat/perc mellett 10 percig centrifugálva összegyűjtjük az élő baktériumsejteket. A sejttömeget háromszor 1000 ml 1/20 mól/l-es, pH=7,0 foszfátpufferrel mossuk, majd 100 ml, a fentivel azonos pufferben szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 50 mg (II) képletű vegyüíetet adunk, és a reagáltatást 37°C-on végezzük 18 órán át rázatással. Ezt követően a reakcióeiegyet a reakció leállítására 5 percig 100°C-on' tartjuk. Ezután a baktériumsejteket a fenti módon végzett centrifugálással elkülönítjük az elegyből, a felüI- úszót 50 ml MCI GeP CHP-20P-vel töltött oszlopra visszük. A termék az oszlopon adszorbeálódik. Az oszlopot vízzel mossuk, a terméket az oszlopról 150 ml 20% víztartalmú metanollal eluáljuk, az eluátumot besűrítjük, és szárazra pároljuk. így 86%-os hozammal 43,0 mg (I) képletű vegyüíetet nyerünk színtelen por formájában. 3. példa A 2. példa szerint járunk el a következő, táblázatban megadott mikroorganizmusok alkalmazásával. A (II) képletű vegyületnek (i) képletű vegyületté való konverzióját (%) a következő táblázatban adjuk meg. 8 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
