197770. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új 9-[(2'R,3'R,4'S)-3'4'-bisz(hidroxi-metil)-2'-oxetanil] hipoxantin és ezt hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
197770 A találmány tárgya eljárás az új, hipoxantin alapú (I) képletü vegyület és az ezt — — hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására. Az adenozin-dezaminázzal végzett dezaminálás az adenozinnal és a 2’-dezoxiadenozinnal — amelyek purin-nukleozidok — kapcsolatosan ismeretes, valamint ismeretes a Cordyceptin és Formycin kapcsán, amelyek purin-nukleozid-antibiotikumok (lásd a Journal of Antibiotics, 18, Ser. A, 191 (1965) szakirodalmi helyen). ... A vírusfertőzések okozta betegségek kezelésénél mindig van igény új hatóanyagokra, mert az ilyeTi betegségek jellegüket tekintve számtalan változatban létezhetnek. Különösen ’ kívánatosak lennének olyan új vírusellenes anyagok, amelyek az AIDS vírus (nemzetközileg javasolt neve a „Human Immunodeficiency Vírus" elnevezés rövidítéseként „HÍV" vírus) és a B típusú hepatitisz vírus szaporodását gátolják. Továbbá, a belső szervek átültetésének és az autoimmun betegségek szaporodásának folytán kívánatossá vált új immunszupreszszánsok kifejlesztése is. Több vizsgálat után arra a felismerésre jutottunk, hogy az új, hipoxantin alapú (I) képletű vegyület vírusellenes és ímmunszupresszív hatással bír. Ezen a felismerésen alapszik a találmány. A mellékelt 1. ábrán a találmány szerint előállított (I) képletű vegyület, azaz a 9- [ (2’R, 3’R, 4’S)-3\ 4’-bisz(hidroxi-meti!)-2’-oxetanil] -hipoxantin deutero-dimetil-szulfoxidban, tetrametil-szilán belső standarddal mért 'H-mágneses rezonancia spektrumát mutatjuk be. A találmány szerint az (I) képletű vegyületet a következő módon állítjuk elő. A (II) képletű adenin alapú vegyületet adenozin-dezamináz vagy ezzel azonos hatást gyakorló anyag hatásának tesszük ki, amely anyag származhat tenyésztett mikroorganizmusból, ebből előállított termékből vagy állati szövetből, így az (I) képletű hipoxantin alapú új vegyületet nyerjük. A reagáltatást pH 5 és 9 közötti, előnyösen 6 és 8 közötti, szokásosan PH=7 értékű pufferben 0—90°C, előnyösen 5—70°C hőmérsékleten végezzük. Alkalmazhatunk kereskedelmi forgalomban beszerezhető adenozin-dezaminázt a találmány szerinti eljárásban. Konkrét példaként említjük az EC3, 5, 4, 4 terméket, amely a Sigma Co. terméke. Ezen kívül például állati szövetből kivont vagy tenyésztett mikroorganizmusból nyert anyagot is használhatunk. Az enzimnek nem kell mindig tisztítottnak lennie. Ha a mikroorganizmus eredetű enzimet alkalmazunk, a tápközegben adenozin-dezamináz termelésére képes mikroorganizmus tenyésztésével kapott mikroorganizmus(sejt-) tenyészetet önmagában is alkalmazhatjuk. Ezen kívül használhatunk acetonnal szárított mikroorganizmus sejtekből készült nyers enzimet, mechanikusan feltárt 2 1 mikroorganizmus sejteket, ultrahang-hullámokkal kezelt mikroorganizmus sejtek felületaktív szerrel kezelt, toluollal kezelt vagy lizozimmal kezelt termékét. Ugyancsak használhatók a szintetikus polimereken rögzített mikroorganizmus sejtek. Konkrétan megnevezve a következő mikroorganizmusok használhatók: Alkaligenes bookeri IFO 12948 Escherichia coli NIHJ Escherichia coli 120551 Escherichia coli 120595 Escherichia coli 120628 Citrobacter freundii GN 346 Proteus morganii IFO 3168 Elytrosporanim brasiliense IFO 1259 Nocardia asteroides IFO 3423 Streptomyces alboniger IFO 12738 Streptomyces californicus IFO 12750 Streptomyces chrestomyceticus IFO 13444 Streptomyces subsp. lasaliensis ATCC 31180 Streptomyces tubercidicus IFO 13090 Streptomyces vertici11 us ATCC 31307 Aspergillus niger IFO 4066 Fusarium roseum IFO 7189 Penicillium chrysogenum JBI-FI Penicillium chrysogenum 51-20T A találmány szerinti eljárás értelmében az (I) képletű vegyület előállítására a (II) képletű vegyületet és az adenozin-dezaminázt 1/2 és 1/30 mól/1 közötti, előnyösen 1/ /10 mól/1-es foszfátpufferben reagáltatjuk pH 5 és 9 közötti, előnyösen pH~7,0 értéken, 5 és 70°C közötti, előnyösen 20 és 30°C közötti, szokásosan 25°C hőmérsékleten, 10 perc és 50 óra közötti, előnyösen 30 perc és 10 óra közötti, szokásosan néhány óra időtartamon át. A reakció során a reakcióelegyben a kívánt (I) képletű vegyület képződik. Ha tenyésztett mikroorganizmust alkalmazunk, valamely, az előzőekben megnevezett mikroorganizmust tápközegben 24 órán át tenyésztünk, majd a tenyészetet közvetlenül felhasználhatjuk. Előnyösen azonban az élő sejteket tartalmazó tenyészetet lecentrifugáljuk, a sejttömeget 1/20 mól/1 -es, pH=7,0 foszfátpufferben felszuszpendáljuk, a kapott szuszpenziót összekeverjük a (II) képletű vegyülettel (oxetanocin), és a reakcióelegyet legfeljebb 20 órán át 20—70°C hőmérsékleten tartjuk, mialatt a kívánt (I) képletű vegyület képződik. A terméket -a reakcióelegyből ismert eljárásokkal különíthetjük el, azaz olyan eljárással nyerhetjük ki, amellyel az inaktív anyagot, például centrifugálással, eltávolítjuk, majd, a kívánt terméket a vízben vagy más szerves oldószerben való oldhatóság-különbség alapján különítjük el vagy aktív-szenes, adszorpciós-gyantás vagy ioncserélő-gyantás abszorpciós-deszorpciós eljárást vagy ezen eljárások megfelelő kombinációját alkalmazzuk. Például a (II) képletű vegyületet az előzőekben említett enzimmel vagy az előzőekben ismertetett mikroorganizmusok mosott sejtjeivel reagáltatjuk, majd az inaktív anya-2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
