197769. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-42867 antibiotikum, addíciós sói és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
197769 6 111. Táblázat 28°C ++ 37°C + + 42°C + 50° C — Azt találtuk, hogy a telepek fejlődése szempontjából a legmegfelelőbb hőmérséklet kb. 22°C-tól kb. 42°C-ig terjed. Az optimális hőmérséklet kb. 28—37°C. pH-tolerancia IV. Táblázat pH 3 — pH 4 — pH 5 + + pH 6 + + pH 7 -j- + pH 8 + + pH 9 + + pH 10 — pH 11 — — : nincs növekedés-j- : mérsékelt növekedés-|- + : bőséges növekedés A fiziológiai jellemzők, a pH- és a hőmérséklet-függés meghatározására végzett kísérletekhez a Hickey-Tresner-f. agar-táptalajt alkalmaztuk. Szénforrás-hasznosítás V. Táblázat 5 Szénforrás Növekedés laktóz ++ arabinóz + + xilóz + + mannóz + + fruktóz + + cellobióz + + galaktóz + + inozit + + glükóz + + raffinóz--ribóz + + szacharóz — szalicin + cellulóz ramnóz — — : nincs növekedés-+- : mérsékelt növekedés + + : bőséges növekedés Ehhez a kísérlethez isp 8. sz. szintetikus táptalajt alkalmaztuk és az eredményeket 10 napi, 28—30°C-on végzett inkubálás után határoztuk meg. Kemotaxonómiai vizsgálatok A törzset V-6 táptalajban tenyésztjük — ennek összetétele: húskivonat 0,5% élesztőkivonat-autolizátum 0,5% pepton 0,5% kazein-hidrolizátum 0,3% glükóz 2% NaCI 0,15% -30°C-on, 200 ford./perc sebességgel forgó rázógépen, 72 órán át. A V-6 táptalajon nőtt micéliumot centrifugálással (3000 ford./ /percXIO perc) elkülönítjük és desztillált vízzel kétszer mossuk. A micéliumot ezután etanollal mossuk, majd szobahőmérsékleten lamináris levegőáramban szárítjuk. A szárított micéliumot teljes sejt készítményként használjuk fel. Aminosav-elemzés: Az aminosav-elemzést a Becker és munkatársai által leírt módon (Rapid differentiation between Nocardia and Streptomyces by paper chromatorgaphy of whole cell hydrolysates, Appl. Microbiol. 12. 421—423, 1964) végezve mezo-diamino-pimelinsav jelenléte mutatható ki. Cukor-elemzés: A cukor-tartalom meghatározását M. P. Lechevalier módszerével végezzük (Identification of aerobic actonomycetes of clinical importance. J. Lab. Clin. Med. 71, 934—944, 1968), vékonyréteg-kromatográfiás lemezeket alkalmazva, a J. L. Staneck és G.D. Roberts (Simplified apparoach to indentification of aerobic actinomycetes by thin-layer chromatography, 28, 226—231, 1974) által leírt módon. Arabinóz és galaktóz jelenléte mutatható ki. A Nocardia sp. ATCC 53492 törzs azonosítása A mezo-diamino-pimelinsav diagnosztikus cukrokkal — amilyen a galaktóz és az arabinóz — együtt való jelenléte arra mutat, hogy ez a törzs — actinomyces, IV. típusú sejtfallal, M. P. Lechevalier és H. Lechevalier (Chemical composition as a criterien in the classification of aerobic actinomycetes, Int. J. Syst. Bacteriol. 20, 435—443, 1970) osztályozása szerint. Mint más mikroorganizmusok esetében, az A 42867 antibiotikumot termelő törzs is változásoknak van kitéve. A törzs mesterséges mutánsai és variánsai állíthatók elő pl. különböző ismert mutagénekkel végzett kezeléssel, amilyen az UV-besugárzás, röntgensugár, nagyfrekvenciájú hullámok, radioaktív besugárzás, vegyszerek — pl. a salétromossav, N-metil-N’-nitro-N-nitrazo-guanidin, stb. Minden természetes és mesterséges mutánst és variánst, amely a Nocardia genus specieseihez tartozik és A 42867 antibiotikumot termel, ekvivalensnek tekintünk a Nocardia sp. ATCC 53492 törzzsel és a találmány oltalmi körébe tartozónak nyílvánítunk. Az A 42867 antibiotikumnak a termelő mikroorganizmus fermentlevéből való kinyerését ismert eljárások segítségével végezzük, amilyen pl. az oldószeres extrakció, kicsapás nem-oldószerek hozzáadásával vagy az oldat pH-jának megváltoztatásával, megosztásos kromatográfia, fordított fázisú megosztásos kromatográfia, ioncserélő kromatográfia, affinitáskromatográfia stb. Előnyben részesítjük azt az eljárást, amely szerint affinitáskromatográfiát végzünk rögzített D-alanil-D-alaninon, majd (ordított fázisú oszlopkromatográfiát hajtunk végre. A találmány szerinti kinyerési eljáráshoz alkalmas rögzített D-alanil-D-alanin mát-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
