197769. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-42867 antibiotikum, addíciós sói és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 197769 2 A találmány tárgya eljárás új, A 42867 jelű antibiotikum, addíciós sói, az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. A szóbanforgó gyógyszerkészítmények fertőző betegségek kezelésére alkalmazhatók, különösen olyan fertőző betegségek kezelésére, amelyeket az ezekre az anyagokra érzékeny mikroorganizmusok váltanak ki. A találmány szerinti eljárással előállítható vegyületek aktívak növekedés-serkentőként is, állatokban, így a baromfi, sertés, kérőzők stb. esetében. A találmány tárgya tehát egy eljárás az A 42867 antibiotikum előállítására, amelyre az jellemző, hogy a Nocardia sp. ATCC 53492 új törzset vagy anrftk A 42867 antibiotikumot termelő mutánsát vagy variánsát tenyésztjük. A Nocardia sp. ATCC 53492 törzset talajból különítettük el és a Budapesti Szerződés előírásai szerint 1986. május 23-án helyeztük letétbe az American Type Culture Collection-nál (ATCC, Rockville, Maryland, Amerikai Egyesült Államok). A törzs az ATCC 53492 nyilvántartási számot kapta. Tekintettel arra, hogy hasonlóság áll fenn az A 42867 antibiotikum és a megfelelő, gyógyászati szempontból elfogadható sók antimikrobális aktivitása között, a leírásban, ha az A 42867 antibiotikum biológiai tulajdonságaival foglalkozunk, ideértjük a megfelelő sókat is és viszont: ha az A 42867 antibiotikum gyógyászati szempontból elfogadható addíciós sóinak biológiai tulajdonságait tárgyaljuk, ez kiterjed a megfelelő „nem-addíciós-só" alakra is. Az A 42867 antibiotikumot úgy állítjuk elő, hogy egy, az ennek előállítására képes Nocardia sp. törzset — azaz a Nocardia sp. ATCC 53492 törzset vagy ennek egy, az A 42867 antibiotikumot termelő mutánsát vagy variánsát-aerób körülmények között tenyésztjük egy vizes táptalajban, amely asszimilálható szén-, nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmaz. A fermentációs iparban rendszerint alkalmazott táptalajok közül számos alkalmazható, egyes táptalajokat azonban előnyben részesítünk. Kitüntetett szénforrás a glükóz, mannóz, galaktóz, keményítő, kukoricaíiszt stb. Kitüntetett nitrogénforrás az ammónia, a nitrátok, szójaliszt, pepton, húskivonat, élesztőkivonat, inpton, aminosavak stb. A táptalajban alkalmazható szervetlen sók közé tartoznak azok a szokásos, oldható sók, amelyek nátrium-, kálium-, vas-, cink-, kobalt-, magnézium-, kalcium-, ammonium-, klorid-, karbonát-, szulfát-, foszfát-, nitrátstb. ion képzésére alkalmasak. Az antibiotikum-termelő törzset rendszerint előtenyésztjük egy rázólombikban, majd ezt a tenyészetet üvegfermenterek beoltására használjuk fel, nagyobb mennyiségű antibiotikum előállítására. Az inokulum előállításához ugyanazokat a táptalajokat alkal-2 mázhatjuk, mint a nagyobb térfogatú fermentáció esetében, de más táptalajok ugyancsak választhatók. Az A 42867 antibiotikumot termelő törzs szokásosan 20°C és 40°C közötti hőmérsékleten, előnyösen 24—35°C között tenyészthető. A fermentáció során az antibiotikum-termelés oly módon követhető, hogy pl. biológiai vizsgálatokkal vagy TLC, ill. HPLC eljárásokkal megvizsgáljuk a fermentlé vagy a micélium-kivonat antibiotikus aktivitását. Vizsgálati organizmusként az A 42867 antibiotikumra érzékeny organizmusok, pl. a Bac. subtilis és a S. aureus használható fel. A biológiai vizsgálatot célszerűen agardiffúziós módszerrel végezzük, agar-lemezeken. Az antibiotikum-termelés maximum rendszerint a fermentáció első és ötödik napja között következik be. Az A 42867 antibiotikumot úgy állítjuk elő, hogy a Nocardia sp. ATCC 53492 törzset vagy ennek egy, az A 42867 antibiotikumot termelő mutánsát vagy variánsát tenyésztjük. Az antibiotikum főként a fermentlében jelenik meg. A Nocardia sp. ATCC 53492 törzs morfológiai tulajdonságai Ennek a törzsnek a morfológiája — földet tartalmazó agar táptalajon végezve a tenyésztést — egy actinomyceséhez hasonlít: nagy mennyiségben képződik légmicélium, hosszú, mérsékelten elágazó hifákkal. Ennek a törzsnek egyik legfontosabb morfológiai jellemzője a szubsztrát- és a légmicélium fragmentáíódása, pálcikaalakú elemekre. A szubsztrót-micélium fragmentálódása a tenyésztési jellemzők meghatározásához használt valamennyi agar táptalajon megfigyelhető volt, de az 5. sz., a 7. sz., a Hickey-Tresner és a tojásalbumin táptalajon teljes fragmentálódást állapíthattunk meg. A Nocardia sp. 53492 törzs szubsztrát-hifái teljesen kifejlődnek, elágazó és fragmentált pálcaalakú elemekkel, a tenyészet korától függően. A légmicélium jól fejlett a talaj-agaron és a vizes agaron. A lég-hiíák a talaj-agaron hosszúak, egyenesek; olykor csomókat vagy hálószerű fonadékot képeznek. Ennek a törzsnek a morfológiája a Nocardia genus törzseire emlékeztet. A törzs morfológiai jellemzőit ugyanazokon a lemezeken határoztuk meg, amelyeket a tenyésztési tulajdonságok vizsgálatára alkalmaztunk. Annak megállapítására, hogy bekövetkezett-e fragmentáció az agar lemezen, a tenyészet felületét műanyag-késsel leemeljük és a mintát üveglemezen, optikai mikroszkóp alatt vizsgáljuk. Folyékony táptalajon a törzs intenzív fragmentációt mutat, bacillushoz hasonló képződmények megjelenése mellett. A Nocardia sp. ATCC 53492 törzs tenyésztési jellemzői A tenyésztési jellemzők meghatározása a Nocardia sp. ATCC 53492 törzset a Shirling 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
