197757. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kromogén vegyületek előállítására

197757

8

7

1. táblázat

Szubszt rátum

kiindulási anyaq

Rf *

piro-Glu-Pro-Arg-Blue 49

pyro-Glu-Pro-Arg(Mtr)-Blue 49

0,04

Z-D-Leu-Gly-Arg-Blue 49

Z-D-Leu-Gly + H-Arg-Blue 49 x 3 TFA

0,4

Tos-Gly-Pro-Arg-Blue 49

Tos-Gly-Pro-Arg(Mtr)-Blue 49

0,04

D-Leu-Pro-Arg-Blue 49

Boc-D-Leu-Pro-Arg(Mtr)-Blue 49

0,07

D-Phe-Tyr-Arg-Blue 49

Boc-D-Phe-Tyr-Arg(Mtr)-Blue 49

0,15

D-Val-Leu-Lys-Blue 49

Boc-D-Val-Leu-Lys(Boc)-Blue 49

0,08

Z-D-Leu-Glu-Gly-Arg-Blue 49

Z-D-Leu-Glu(tBu)-Gly-Árg-Blue 49

0,42

D-Phe-Pro-Arg-Blue 124

Boc-D-Phe-Pró-Arg(Mtr)-Blue 124

0,09

D-Pro-Phe-Arg-Blue 49

Boc-D-Pro-Phe-Arg(Mtr)-Blue 49

0,08

D-Pro-Phe-Arg-Blue 124

Boc-D-Pro-Phe-Arg(Mtr)-Blue 124

0,07

D-Xle-Leu-Pro-Arg-Blue 49

Z-D-Ile-Leu-Pro-Arg(NOj)-Blue 49

0,1

D-Phe-Pip-Arg-Blue 49

Z-D-Phe-Pip-Arg(NC^)-Blue 49

0,09

D-Ala-Gly-Arg-Blue 49

Boc-D-Ala-Gly-Arg(U02)-Blue 49

0,08

D-Val-Tyr-Arg-Blue 49

Boc-D-Val-Tyr(tBu)-Arg(Mtr)-Blue

49

0,12

A szubsztrátum R^-értékét butanol,

jégecet és víz 3:1:1 tf~arányű elegyével

határoztuk

ioncserélő kroraatográfia

A szubsztrátumok vizsgálata 800 pl 8,0 pH-jú pufferoldathoz (trisz-hidroxi-amino-metán 50 mmól/1) 37°C-on az enzimoldat 100 pl szubsztrátumoldatot (koncentráció: 2 mmól/1) adunk. A lehasított para-nitranilint 405 nm hullámhosszon, a Blue 49, illetve Blue 121 színezéket viszont 623 nm-nél. Az enzimes hasítás sebességét az optikai sűrűség 30 percenkénti változásaként határozzuk meg. A (II) táblázatban néhány szubsztrátum és enzim relatív hasítási sebességét, azaz a szubsztrátum specifitását adjuk meg.

II. táblázat

Szintetikus szubsztrátum_____ urokináz______ C-protein______tromDiri alazmin F \a kallikrein

H-D-Phe-Pip-A.rg-pNA H-D-Phe-Pro-Arg-Blue 49

pyro-Glu-Pro-Arg-pNA H-D-Leu-Pro-Arg-Blue 49 pyro-Glu-Pro-Arg-Blue 49 1,0

pyro-Glu-Gly-Arg-pNA Tos-Gly-Pro-Arg-Blue 49

Az alkalmazott rövidítések

Blue 49

7-amino-3-dietilamino-8-metil-fenoxazónium-hemitetraklórcinkát

Blue 124

7-amino -3 -dietilamino -8 -metoxi-fenoxazónium-hemitetraklórcinkát

N

az arginin guanidinnocsoportjának nitrogéncsoportja

Mtr

4 -metoxi-2,3,6-tri met ilfenil -szulfát

Boc

terc-butiloxikarbonil-csoport

HOBt

hidroxibenzotriazol

R /

retenciós tényező

z

benziloxikarbonil-csoport

Fmoc

9-floureniloxikarbonil-csoport.

C , 075

0,4 1

0,035

0,025

0,11

f'703

0,395

0,00

0,01

0,00

C , 40

0,41

0,53

0,04

0,51

C , 4 7

0,09

0,015

0,035

0,015

0,22

0,015

0,03

0,02

0,015

0,30

0,00

0,01

0,01

0,01

0,76

0,15

0,02

0,095

0,02

A vékonyréteg-kromatográfiához használt oldószerelegyek összetétele:

A) butanol (jégecet) víz 3:1:1 térfogatarányú

55 elegye

B) k!oroform(metanol)jégecet 50:10:5 térfogatarányú elegye

C) kloroform (metanol) jégecet 50:10:2,5 tf-arányú elegye

0Q D) kloroform (metanol) jégecet 50:15:3 tf-arányú elegye

E) kloroform(metanol/jégecet)víz 20:10:2:1 tf-arányú elegye

Az aminosavak rövidítései az IUPACIUB szabályozásának (Biochem. J. 219, 345—373,

1984) felelnek meg.

5