197745. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirido[2,3-b] [1,4]-benzodiazepin-6-on származékok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
11 197745 Teljes szív: 1:400 Nagyagykéreg: 1:3000 Submandibularis: 1:400 A szervhomogenizátumnak az inkubálása egy meghatározott radioaktív ligandum- 5 koncentrációval, valamint a nemradioaktív vizsgálati anyagokból összeállított, különböző koncentrációjú sorozattal történt, 30°C- on, egy Eppendorf-centrifugacsőben. Az inkubálási idő 45 perc volt. Radioaktív ligán- 10 dumként 0,3 nmolos 3H-N-metil-szkopol-amint (3H-NMS) alkalmaztunk. Az inkubálást jéghideg puffer hozzáadásával, majd ezt követőleg vákuumszűréssel fejeztük be. A szűrőt a hideg pufferrel átöblítettük, majd mégha- 15 tároztuk a szűrő radioaktivitását, amely a fajlagos és a nemfajlagos 3H-NMS-megkötés összegét képviseli. A nemfajlagos kötődésre eső részt azzal a radioaktivitással definiáltuk, amely 1 pmól kinuklidinil-benzilát 20 jelenlétében volt kimutatható. Minden esetben négyszer végeztük el a mérést. A nem jelzett vizsgálati anyagok IC50-értékeit grafikusan határoztuk meg. Ezek az értékek a vizsgáit anyagra vonatkozóan azt a koncent- 25 rációt adják meg, amelynél a 3H-NMS fajlagos kötődése a különböző szervek muszkarinreceptorian 50%-kal gátolt volt. Az eredmények az 1. táblázatban láthatók. 30 2. „In vivo": az ID50-érték meghatározása Ezeknek a kísérleteknek a kísérleti állatai mintegy 200 g súlyú nősténypatkányok voltak. A kísérletek megkezdése előtt az állatokat 1,25 g/kg uretánnal narkotizáltuk. 35 Az állatok mindegyike intravénás injekcióval kapta meg az előirányzott dózist a vizsgált vegyületből, majd 15 perc eltelte után I. táblázat: A megkötődés in rokon az állatok ugyanilyen módon 113 ng/kg 3H-N-metil-szkopol-amint (3H-NMS) kaptak. További 15 perc elteltével az állatokat megöltük és eltávolítottuk belőlük a szívet, a légcsövet és a könnymirigyeket. Ezeket a szerveket Soluene R-ben feloldottuk és meghatároztuk a radioaktivitást. Feltételeztük, hogy ezek a hlért értékek adják meg a megkötés teljes nagyságát. A nemfajlagos megkötésre eső rész az a radioaktivitás volt, amelyet 2 mg/kg atropin hozzáadásával nem tudtunk elnyomni. Ezekből az értékekből meghatároztuk az egyes szervekre az IDS0-értékeket. Az ID50-értékek a vizsgált anyagnak azok a dózisértékei, amelyek az adott szerv muszkarinreceptorain 50%-kal gátolják a fajlagos megkötést. Az eredményeket az V. táblázat tartalmazza. Az előbbiekben felsorolt adatokat például a következő vegyületekre vonatkozóan határoztuk meg: A = 9-klór-l 1 - [ [2- [ (dietil-amino)-metil] -1- -piperidinil] -acetil] -5,11 -dihidro-6H-pirido[2,3-b] [l,4]-benzodíazepin-6-on; és mint összehasonlítás célját szolgáló anyagokra: B = 11- [ [2- [ (dietil-amino) -metil] -1-piperidinil] -acetil] -5,1 l-dihidro-6H-pirido(2,3-b] [1,4] -benzodiazepin-6-onra (lásd a 4 550 107. sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást); C = 5,11-dihidro-l 1- [(4-metil-1 -piperazinil] - -acetil] -6H-pirido [2,3-b] [1,4] benzodiazepin-6-onra (pirenzepinre) (lásd a 3 660 380. sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást); és D = atropínre. vitro vizsgálata recepto-12 A vegyület jelölése I05o -nmol/1 Kéregállomány Szív Submandibular i s A 500 50 1500 B 1200 140 JOOO 150 5000 C 100 1500 200 D 2 4 4 8
