197732. lajstromszámú szabadalom • Eljárás naftotiazepinon származékok és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására

197732

chim.Biophys. Res.Commun. 77, 1203 (1977) ] A reakcióelegy 1,0 ml-es végső inkubációs térfogatban az alábbi komponenseket tartalmazza: 2 mM ATP, 18 mM—18 mM hisztidin-imidazol-puffer, pH=7,l, 0,1 mM EGTÄ, 3 mM EGTA, 3 mM MgCI2, 80 mM NaCl, 15 mM KC1, 0,1 mM ouabain, CaM, 200 pg eritrocita-„kísértet“-fehérjék és a teszt-vegyület. Valamennyi kémcső CaCl2-t (0,2 mM) tartalmaz, kiveve a Mgr+-AtPase meghatározására szolgáló kémcsövet. A reakciót ATP hozzáadásával megindítjuk és 37°C-on 30 percen át folytatjuk. A felszabaduló szervetlen foszfátot meghatározzuk. A fehérjét Lowry és tsai módszerével határozzuk meg [J. Bioi. Chem. 193, 265 (1951)].

CaM-deficiens eritrocita-membránok Ca2+Mg2+-AtPase-t eredményeznek, amelyet a CAM az alap-aktivitás fölé stimulál. Az alap

11

Ca2+-Mg2 + -AtPase fajlagos aktivitása 10 nmól szervetlen foszfát/mg fehérje/perc, míg a maximálisan aktivált enzim megfelelő értéke 40—50 nmól szervetlen foszfát/mg 5 fehérje/perc. Az alábbi tesztek során a CaM-koncentrációt 2 egységre állítjuk be (a CaM-egységeket a Sigma Chemical Company írta le). A teszt-vegyület aktivitását a CaM-stimulált aktivitás %-os gátlásában számít- 10 juk ki. A %-os gátlás és a teszt-vegyület koncentráció-összefüggése alapján koncentráció-reagálás görbét szerkesztünk és grafikusan meghatározott 1C50 értéknek a teszt-vegyület 50%-os gátlást előidéző koncentráció- 15 ját tekintjük.

A teszt-vegyületeknek a fenti teszt során mutatott aktivitását a II. táblázatban tüntetjük fel.

12

20

I. táblázat

Szisztóláa vérnyomás SH patkányon

Teszt-vegyület

SBP

Időtartam

/A Hgmm/

/óra/

A-67+7

19

B-63+9

24

A fenti táblázatban a dózis 50 mg/kg p.o. B = ( + )-cisz-2,3-dihidro-3-hidroxi-2-(4-met-Az alábbi teszt-vegyületeket alkalmazzuk: oxi-fenil)-5- [2-(dimetil-amino)-etil]-naf-A = (-)-) -cisz-2,3-dihidro-3- (acetil-oxi) -2- (4- to [1,2-b]-1,4-tiazepin-4 (5H)-on.

-metoxi-fenil)-5- [--(dimetil-amino)-etil] - -naftofl ,2-b] -l,4-tiazepin-4 (5H)-on;

II. táblá Zeit

Tengerimaiac-ileum assay, tónikus kontrakció

Teszt-vegyület

Assay IC50 /M/

ATPase-teszt

IC50 //UH/

A

1,3

X

10“6

5,4

B

1,1

X

10~6

>80

C

5,2

X

10“7

17,2

D

2,3

X

10“7

6,5

E

5,6

X

10“5

17,8

¥-9,9

0

6,3

X

ío-5

>80

H

4,6

X

io-5

52

7